تفاوت اصلی بین فیلتراسیون ژل و کروماتوگرافی میل ترکیبی این است که کروماتوگرافی فیلتراسیون ژل به تفاوت وزن مولکولی یا اندازه نمونه آنالیت بستگی دارد، در حالی که کروماتوگرافی میل ترکیبی به میل ترکیبی آنالیت به لیگاند بی حرکت بستگی دارد.
اصطلاح کروماتوگرافی در شیمی تجزیه به فرآیند جداسازی اجزا در یک مخلوط با استفاده از تکنیک های مختلف اشاره دارد. کروماتوگرافی یک نام جمعی است که نشان دهنده تعداد مختلفی از روش های مختلف برای جداسازی است.
کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون چیست؟
کروماتوگرافی فیلتراسیون ژل یک تکنیک تحلیلی است که در آن جداسازی اجزا به تفاوت وزن مولکولی یا اندازه بستگی دارد. این روش همچنین به عنوان کروماتوگرافی با اندازه حذف یا کروماتوگرافی غربال مولکولی شناخته می شود. تکنیک جداسازی در این فرآیند به توانایی متفاوت مولکول‌های نمونه برای ورود به منافذ محیط ژل فیلتراسیون بستگی دارد.
در تکنیک فیلتراسیون ژل، فاز ثابت حاوی دانه‌هایی از مواد هیدراته و اسفنج مانند است که دارای منافذی با ابعاد مولکولی است که دارای طیف باریکی از اندازه‌ها هستند. اگر یک محلول آبی متشکل از مولکولهایی با اندازه‌های مختلف را از طریق ستونی حاوی این «الک‌های مولکولی» عبور دهیم، مولکولهایی که بزرگ‌تر از منافذ محیط فیلتر هستند، به سرعت در ستون حرکت می‌کنند. در مقابل، مولکول های کوچکتر وارد منافذ ژل می شوند و تمایل دارند به آرامی در ستون حرکت کنند. مولکول ها از ستون به ترتیب کاهش اندازه مولکولی شسته می شوند.در اینجا، حد حذف ژل، جرم مولکولی کوچکترین مولکولهایی است که قادر به نفوذ به منافذ یک ژل نیستند.
انواع مختلفی از تکنیک های فیلتراسیون ژل وجود دارد، مانند روش فیلتراسیون ژل غیرمستقیم، فیلتراسیون ژل حالت پایدار، دیالیز ژل مهره و غیره. کروماتوگرافی فیلتراسیون ژل غیرمستقیم در تعیین هورمون های تیروئید آزاد مفید است. کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون حالت پایدار یک تکنیک غیر مستقیم است که بیشتر برای اندازه گیری استروئیدهای آزاد مانند کورتیزول، تستوسترون و غیره مفید است.
کروماتوگرافی قرابتی چیست؟
کروماتوگرافی میل ترکیبی یک تکنیک تحلیلی و یک روش جداسازی است که به یک برهمکنش اتصال خاص بین لیگاند بی حرکت و شریک اتصال آن بستگی دارد.برخی از نمونه ها عبارتند از: اتصال آنتی بادی به آنتی ژن، اتصال آنزیم به سوبسترا و اتصال آنزیم به بازدارنده. بنابراین، این تکنیک کاربردهای مهم بسیاری در تصفیه اسید نوکلئیک، تصفیه پروتئین از عصاره سلولی و تصفیه از خون دارد.
در این تکنیک مهمترین خاصیت تثبیت لیگاند است. برای این کار می توانیم از مواد مختلفی مانند آکریلات ها و سیلیکا ژل استفاده کنیم. مهم است که از تداخل فضایی مولکول هدف با لیگاند جلوگیری شود. علاوه بر این، یک بازدارنده به فاز جامد متصل است. ما به این بازدارنده فاصله‌گذار می‌گوییم. به طور کلاسیک، یک اسپیسر از یک زنجیره هیدروکربنی تشکیل شده است.
فاز ثابت کروماتوگرافی میل ترکیبی شامل هسته، اسپیسر و لیگاند است.گاهی اوقات، یک یون فلزی نیز دارد که با لیگاند جفت می شود. ترجیح داده شده ترین فاز جامد برای فاز ثابت در این تکنیک، ژل آگارز است زیرا به راحتی برای پر کردن و بسته بندی ستون با بسترهای رزینی با هر اندازه ای توزیع می شود و به اندازه کافی بزرگ است که مولکول های زیستی آزادانه به داخل و از طریق مهره ها جریان پیدا کنند. لیگاندها می توانند به روش های مختلف به صورت کووالانسی به پلیمر مهره بچسبند. رایج ترین ترکیبات فاصله دهنده عبارتند از سیانوژن برومید، اپوکسید، اپوکسید با اسید C6 و دیامین. از سوی دیگر، لیگاندی که می‌توانیم استفاده کنیم با توجه به هدف متفاوت است، به‌عنوان مثال، آنتی‌بادی-آنتی ژن، یون‌های آهن یا آلومینیوم- فسفوپروتئین، آویدین-بیوتین، گلوتاتیون-GST، پروتئین‌های دارای برچسب شلاتور-His و غیره.
تفاوت بین فیلتراسیون ژل و کروماتوگرافی میل ترکیبی چیست؟
کروماتوگرافی یک تکنیک تحلیلی مهم است. کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون و کروماتوگرافی میل ترکیبی دو نوع مهم کروماتوگرافی هستند. تفاوت اصلی بین فیلتراسیون ژل و کروماتوگرافی میل ترکیبی در این است که کروماتوگرافی فیلتراسیون ژل به تفاوت وزن مولکولی یا اندازه نمونه آنالیت بستگی دارد، در حالی که کروماتوگرافی میل ترکیبی به میل ترکیبی آنالیت به لیگاند بی حرکت بستگی دارد.
خلاصه - فیلتراسیون ژل در مقابل کروماتوگرافی میل ترکیبی
انواع مختلفی از تکنیک های کروماتوگرافی با توجه به کاربرد آنها و ماهیت نمونه آنالیت وجود دارد. فیلتراسیون ژل و کروماتوگرافی میل ترکیبی دو نوع از این تکنیک ها هستند. تفاوت اصلی بین فیلتراسیون ژل و کروماتوگرافی میل ترکیبی در این است که کروماتوگرافی فیلتراسیون ژل به تفاوت وزن مولکولی یا اندازه نمونه آنالیت بستگی دارد، در حالی که کروماتوگرافی میل ترکیبی به میل ترکیبی آنالیت به لیگاند بی حرکت بستگی دارد.
