تفاوت کلیدی – مستقیم در مقابل الایزای غیرمستقیم
ایمونواسی مرتبط با آنزیم (ELISA)، همچنین به عنوان ایمونواسی آنزیمی شناخته می شود، یک آزمایش سرولوژیکی است که آنتی بادی ها را در خون تشخیص می دهد. از آن به عنوان یک ابزار تشخیصی برای کشف اینکه آیا بیمار در معرض نوع خاصی از ویروس یا عامل عفونی دیگر (آنتی ژن) قرار گرفته است و آیا بدن آنتی بادی علیه عفونت تولید کرده است استفاده می شود. الایزا همچنین می تواند عفونت های گذشته و فعلی را شناسایی کند. از این رو، ELISA اغلب به عنوان یک آزمایش پیش غربالگری توسط پزشکان قبل از تجزیه و تحلیل عمیق بیماری ها استفاده می شود. این آزمایش را می توان در آزمایشگاه با گرفتن نمونه خون از بیمار انجام داد.دو نوع آزمایش الایزا وجود دارد: الایزا مستقیم و الایزا غیر مستقیم. تفاوت اصلی بین الایزای مستقیم و غیرمستقیم این است که الایزای غیرمستقیم حساس تر است و نیاز به افزودن یک آنتی بادی ثانویه دارد در حالی که الایزای مستقیم حساسیت کمتری دارد و فقط از یک آنتی بادی اولیه استفاده می کند.
الایزای مستقیم چیست؟
ELISA یک آزمایش تشخیصی بیماری است که برای شناسایی وجود آنتی ژن یا آنتی بادی خاص در خون انجام می شود. به صورت پلیت سنجش انجام می شود. از آنتی‌بادی‌هایی استفاده می‌کند که با آنزیم‌هایی که به راحتی قابل سنجش هستند، مرتبط هستند. حضور آنتی ژن ها در نمونه سرم با آنتی بادی های خاص مرتبط با آنزیم ها متصل می شود. در مرحله آخر، یک بستر خاص برای واکنش با آنزیم اضافه می شود. آنزیم بستر را به یک محصول رنگی یا تولید کننده سیگنال تبدیل می کند. تغییر رنگ در بستر شیمیایی وجود یک آنتی بادی خاص را در نمونه سرم آشکار می کند. آزمایش الایزا مستقیم فقط از یک آنتی بادی اولیه مرتبط با آنزیم استفاده می کند. پس از اتصال به آنتی ژن، رنگ آن به سرعت تغییر می کند که نشان دهنده وجود عامل عفونی در خون است.با این حال، شدت سیگنال ها در ELISA مستقیم ضعیف تر است زیرا اپی توپ ها محدود به اتصال آنتی ژن ها هستند. بنابراین، الایزای مستقیم در مقایسه با الایزای غیرمستقیم حساسیت کمتری دارد.
شکل 01: آزمایش مستقیم الایزا
الایزای غیرمستقیم چیست؟
الایزا را می توان با استفاده از دو نوع آنتی بادی انجام داد. آنتی بادی اولیه و آنتی بادی ثانویه ابزار ELISA غیر مستقیم از هر دو نوع آنتی بادی برای تقویت سیگنال ها برای تشخیص بهتر استفاده می کند. روش الایزا غیر مستقیم به شرح زیر انجام می شود.
- صفحات با آنتی ژن انکوبه می شوند و برای جلوگیری از اتصال غیر اختصاصی شسته می شوند.
- سپس آنتی بادی های اولیه اضافه می شوند و شسته می شوند.
- آنتی بادی ثانویه مرتبط با آنزیم اضافه شده و شسته می شود.
- یک سوبسترا اضافه می شود و اجازه داده می شود با آنزیم ها واکنش دهد.
- سیگنال ها شناسایی می شوند و وجود یا عدم وجود آنتی ژن خاص در نمونه مشخص می شود.
در آزمایش الایزا غیر مستقیم، چند آنتی بادی ثانویه می توانند به یک آنتی بادی اولیه متصل شوند. آنتی بادی های ثانویه با آنزیم هایی که به راحتی قابل سنجش هستند مرتبط هستند. بنابراین، یک اتصال می تواند سیگنال قوی به دلیل بیش از یک تعامل ایجاد کند. از این رو، الایزای غیرمستقیم حساس تر از الایزای مستقیم است. با این حال، ELISA غیرمستقیم می‌تواند سیگنال‌های غیراختصاصی به دلیل واکنش متقابل آنتی‌بادی‌های ثانویه ایجاد کند.
شکل 02: تست الایزا غیر مستقیم
تفاوت بین ELISA مستقیم و غیر مستقیم چیست؟
ELISA مستقیم در مقابل غیر مستقیم |
|
| الایزای مستقیم در مقایسه با الایزای غیرمستقیم حساسیت کمتری دارد. | الایزای غیرمستقیم حساس تر است. |
| زمان صرف شده | |
| آزمایش مستقیم الایزا یک فرآیند سریع است. | الایزای غیرمستقیم زمان‌بر است. |
| استفاده از آنتی بادی | |
| فقط یک نوع آنتی بادی (آنتی بادی های اولیه) در الایزا مستقیم استفاده می شود. | آنتی بادی های اولیه و ثانویه برای الایزا غیر مستقیم استفاده می شوند. |
| پیوند با آنزیم | |
| آنتی بادی های اولیه با آنزیم ها مرتبط هستند. | آنتی بادی های ثانویه با آنزیم ها مرتبط هستند. |
| واکنش متقابل آنتی بادی های دوم | |
| الایزای مستقیم واکنش متقاطع آنتی بادی های دوم را از بین می برد. | الایزای غیرمستقیم با واکنش متقاطع آنتی بادی های دوم تحت تأثیر قرار می گیرد. |
| سیگنال | |
| سیگنال ها در مقایسه با ELISA غیرمستقیم ضعیف هستند. | سیگنال هایدر الایزای غیرمستقیم تقویت می شوند. از این رو، تشخیص آن آسان است. |
خلاصه - مستقیم در مقابل ELISA غیر مستقیم
ELISA یک تکنیک بیوشیمیایی است که عمدتاً در ایمونولوژی برای تشخیص وجود یک آنتی بادی یا آنتی ژن در نمونه خون یک بیمار استفاده می شود. می توان از طریق دو فرآیند به نام ELISA مستقیم یا غیر مستقیم انجام داد. آزمایش الایزا مستقیم فقط از آنتی بادی های اولیه برای تشخیص آنتی ژن استفاده می کند در حالی که الایزا غیر مستقیم از آنتی بادی های اولیه و ثانویه استفاده می کند.در ELISA مستقیم، آنتی بادی های اولیه نشاندار می شوند در حالی که در ELISA غیر مستقیم، آنتی بادی های ثانویه نشاندار می شوند. این تفاوت بین ELISA مستقیم و غیر مستقیم است.
