تفاوت کلیدی بین Klenow و DNA پلیمراز T4 در این است که قطعه Klenow قطعه بزرگی از E. coli DNA پلیمراز 1 است در حالی که T4 DNA پلیمراز DNA پلیمراز 1 از باکتریوفاژ T4 است.
DNA پلیمرازها آنزیم هایی هستند که با افزودن دئوکسی ریبونوکلئوتیدها به انتهای 3'-OH یک آغازگر از قبل موجود، تشکیل DNA را کاتالیز می کنند. انواع مختلفی از DNA پلیمرازها وجود دارد. بیشتر DNA پلیمرازهای مورد استفاده در زیست شناسی مولکولی، DNA پلیمرازهای پروکاریوتی هستند. قطعه کلنو و DNA پلیمراز T4 دو نوع DNA پلیمراز هستند که منشا پروکاریوتی دارند. قطعه کلنو قطعه بزرگی است که از شکاف E ایجاد می شود.coli DNA پلیمراز 1 به دو قطعه توسط باکتری پروتئاز سوبتیلیسین. DNA پلیمراز T4 DNA پلیمراز 1 باکتریوفاژ T4 است. هر دو Klenow و T4 DNA پلیمراز دارای فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' پلیمراز و 3'→5' هستند. هر دو فاقد فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' هستند، که آنها را برای بسیاری از کاربردها در زیست شناسی مولکولی مناسب تر می کند.
Klenow چیست؟
قطعه کلنو یک DNA پلیمراز است که در زیست شناسی مولکولی مفید است. هنگامی که E. coli DNA پلیمراز 1 تحت هضم پروتئولیتیک توسط پروتئاز باکتریایی، سوبتیلیسین قرار می گیرد، منجر به دو قطعه می شود: یکی یک قطعه بزرگ و دیگری یک قطعه کوچک. قطعه کلنو قطعه بزرگی است که 68 کیلو دالتون اندازه دارد. قطعه کلنو دارای فعالیت های پلیمراز 5'→3' و اگزونوکلئاز 3'→5 (تصحیح) DNA Pol I است. فعالیت اگزونوکلئاز 3'→5' قطعه کلنو حذف بازهای نادرست اضافه شده را با پیشرفت پلیمریزاسیون تسهیل می کند. قطعه کلنو حاوی فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' نیست، که توسط E تمام قد یا دست نخورده نشان داده می شود.coli DNA polymerase 1. زمانی سودمند است که فقط فعالیت پلیمریزاسیون به تنهایی مورد نیاز باشد. قطعات کلنو برای پر کردن اورهانگ های 5، سنتز پروب ها، توالی یابی DNA، سنتز DNA دو رشته ای، سنتز رشته دوم cDNA و جهش زایی مکان گردان استفاده می شود.
شکل 01: قطعه کلنو
در کاربردهای خاص، فعالیت اگزونوکلئاز 3'→5' قطعه کلنو نیز نامطلوب می شود. با وارد کردن جهش به ژنی که قطعه کلنو را کد می کند، می توان آن را حذف کرد. قطعه کلنو به دست آمده به قطعه exo-Klenow معروف است. بنابراین، قطعه exo-Klenow فقط فعالیت پلیمراز 5'→3' E. coli پلیمراز 1 را دارد.
T4 DNA polymerase چیست؟
T4 DNA پلیمراز یک DNA پلیمراز است که سنتز DNA را کاتالیز می کند.این یک پروتئین است که توسط باکتریوفاژ T4 رمزگذاری شده است. از نظر ساختاری، DNA پلیمراز T4 یک پروتئین باقیمانده اسید آمینه 898 (وزن مولکولی 103.6 کیلو دالتون) است. برای کاتالیز کردن سنتز به یک الگو و یک آغازگر نیاز دارد.
شکل 02: T4 DNA پلیمراز
مشابه قطعه کلنو، DNA پلیمراز T4 هر دو فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' و اگزونوکلئاز 3'→5 دارد. علاوه بر این، فاقد فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' نیز هست. DNA پلیمراز T4 در پر کردن انتهای 5'-برآمده قطعات DNA مفید است. همچنین اغلب برای برچسب زدن 5 یا 3' انتهای DNA دو رشته ای استفاده می شود. DNA پلیمراز T4 اغلب در شبیه سازی بلانت استفاده می شود. فعالیت اگزونوکلئاز 3'→5' (تصحیح) DNA پلیمراز T4 قوی تر (بیش از 200 برابر) از قطعه کلنو است. مهمتر از همه، T4 DNA پلیمراز دارای فرآیند بالایی است (400 نوکلئوتید در ثانیه).
شباهت های بین Klenow و T4 DNA Polymerase چیست؟
- Klenow و T4 DNA polymerase دو پلیمراز پروکاریوتی هستند.
- هر دو پلیمراز دارای فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' و اگزونوکلئاز 3'→5 هستند.
- آنها فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' را نشان نمی دهند.
- هر دو آنزیم برای کاتالیز کردن سنتز DNA به یک الگو و یک آغازگر نیاز دارند.
- این آنزیم ها را می توان با گرما در 75 غیرفعال کرد 0
تفاوت بین Klenow و T4 DNA Polymerase چیست؟
تفاوت کلیدی بین Klenow و DNA پلیمراز T4 در منشا هر آنزیم است. قطعه کلنو از یک باکتری منشاء می گیرد در حالی که T4 DNA پلیمراز از یک باکتریوفاژ که یک ویروس است منشاء می گیرد. T4 DNA پلیمراز پردازش بالایی نسبت به قطعه Klenow دارد. علاوه بر این، T4 DNA پلیمراز دارای فعالیت تصحیح قوی نسبت به قطعه Klenow است.بنابراین، این تفاوت دیگری بین Klenow و DNA پلیمراز T4 است.
نمودار اطلاعاتی زیر تفاوت های بیشتری را بین Klenow و DNA پلیمراز T4 به شکل جدولی فهرست می کند.
خلاصه - کلنوو در مقابل DNA پلیمراز T4
قطعه کلنو قطعه بزرگی از E. coli DNA پلیمراز 1 است. این قطعه فقط دارای 5'→3' پلیمراز و 3'→5' اگزونوکلئاز است. فاقد فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' DNA pol 1 سالم E. coli است. بنابراین، قطعه کلنو یک پلیمراز باکتریایی است. از طرف دیگر، DNA پلیمراز T4 یک پلیمراز است که توسط باکتریوفاژ T4 کدگذاری شده است. مشابه قطعه کلنو، دارای هر دو فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' پلیمراز و 3'→5' اگزونوکلئاز است و فاقد فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' است. با این حال، T4 DNA پلیمراز دارای پردازش بالا و فعالیت تصحیح بالایی نسبت به قطعه Klenow است.بنابراین، این تفاوت کلیدی بین Klenow و T4 DNA پلیمراز است.
