تفاوت کلیدی بین RP HPLC و HIC این است که RP HPLC از یک فاز متحرک قطبی تر و یک فاز ثابت قطبی کمتر استفاده می کند. در حالی که HIC از یک فاز ثابت آبگریز استفاده می کند که به مولکول های آبگریز اجازه می دهد به آن بچسبند.
کروماتوگرافی یک تکنیک تحلیلی است که به جداسازی مخلوط به اجزای آن کمک می کند. ابتدا باید نمونه را حل کنیم تا در محلول جدا شود. این مخلوط محلول و ماده فاز متحرک نامیده می شود. سپس فاز متحرک از ماده دیگری به نام فاز ثابت عبور داده می شود. فاز ثابت جداسازی اجزا را تعیین می کند. این جداسازی به دلیل تقسیم مواد بین فاز متحرک و فاز ثابت رخ می دهد.
RP HPLC چیست؟
اصطلاح RP HPLC مخفف کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا با فاز معکوس است. این شامل جداسازی اجزا در یک مخلوط، بر اساس آب گریزی است. اجزای آبگریز در فاز متحرک با لیگاندهای آبگریز تثبیت شده در فاز ساکن پیوند دارند، در حالی که اجزای آبدوست از طریق فاز ساکن بدون چسبیدن به سطح فاز ساکن شسته می شوند.
شکل 01: دستگاه HPLC
علاوه بر این، این روش در مقایسه با سایر تکنیک های کروماتوگرافی قابلیت تکرارپذیری بیشتری دارد و همچنین کاربرد وسیعی را نشان می دهد. بنابراین، ما از این روش در آزمایشگاه ها برای بیش از 75 درصد از تمام روش های HPLC استفاده می کنیم. بیشتر اوقات، ما از یک ترکیب آبی آب با یک حلال آلی قطبی قابل اختلاط به عنوان فاز متحرک استفاده می کنیم.بنابراین، اتصال اجزای آبگریز در محلول به سطح فاز ساکن را تضمین می کند.
HIC چیست؟
اصطلاح HIC مخفف کروماتوگرافی برهمکنش هیدروفوبیک است. این یک نوع HPLC فاز معکوس است و از این روش عمدتاً برای جداسازی بیومولکول های بزرگ مانند پروتئین ها استفاده می شود. در این روش برای ساختن نمونه زیست مولکول باید از محیط آبی استفاده کنیم. به این دلیل است که حلال های آلی می توانند باعث دناتوره شدن پروتئین ها شوند. علاوه بر این، این تکنیک از برهمکنش بین مولکول های بزرگ با سطح کمی آبگریز فاز ساکن استفاده می کند. علاوه بر این، ما باید از غلظت نمک بالا در نمونه استفاده کنیم زیرا باعث می شود پروتئین روی بسته بندی باقی بماند. این فرآیند نمک زدایی نامیده می شود. با کاهش تدریجی غلظت نمک، می‌توانیم مولکول‌های زیستی را با توجه به آبگریزی آنها به طور جداگانه شستشو دهیم.
معمولاً در این روش از شرایط مخالف کروماتوگرافی تبادل یونی استفاده می شود.در این تکنیک ابتدا باید یک محلول بافر را از ستون عبور دهیم تا حلالیت املاح در نمونه کاهش یابد. این باعث می شود که مناطق آبگریز پروتئین در معرض دید قرار گیرند. با این حال، زمانی که مولکول بیشتر آبگریز است، نمک کمتری برای تقویت اتصال مورد نیاز است. در اینجا ابتدا املاح آبگریز کمتر و با توجه به تغییر غلظت نمک، املاح آبگریز بیشتری در آخر شسته می شوند.
تفاوت بین RP HPLC و HIC چیست؟
کروماتوگرافی یک تکنیک تحلیلی برای جداسازی اجزای یک مخلوط است. RP HPLC و HIC دو تکنیک تخصصی کروماتوگرافی هستند. تفاوت اصلی بین RP HPLC و HIC در این است که RP HPLC از فاز متحرک قطبی تر و فاز ساکن قطبی کمتر استفاده می کند، در حالی که HIC از فاز ساکن آبگریز استفاده می کند که به مولکول های آبگریز اجازه می دهد به آن متصل شوند.
اینفوگرافیک زیر تفاوت بین RP HPLC و HIC را خلاصه می کند.
خلاصه - RP HPLC در مقابل HIC
کروماتوگرافی یک تکنیک تحلیلی برای جداسازی اجزای یک مخلوط است. RP HPLC و HIC دو تکنیک تخصصی کروماتوگرافی هستند. تفاوت اصلی بین RP HPLC و HIC در این است که RP HPLC از یک فاز متحرک قطبی تر و یک فاز ساکن کمتر قطبی استفاده می کند، در حالی که HIC از یک فاز ساکن آبگریز استفاده می کند که به مولکول های آبگریز اجازه می دهد به آن متصل شوند.
