تفاوت کلیدی FPLC و HPLC در این است که FPLC نوعی کروماتوگرافی مایع است که بیومولکول های بزرگی مانند پروتئین ها، نوکلئوتیدها و پپتیدها را تصفیه می کند، در حالی که HPLC نوعی کروماتوگرافی مایع است که ترکیبات با وزن مولکولی کوچک را جدا می کند..
کروماتوگرافی مایع تکنیکی است که برای جداسازی نمونه به اجزای جداگانه آن استفاده می شود. این جداسازی به دلیل برهمکنش نمونه های خاص با فازهای متحرک و ثابت رخ می دهد. اجزای داخل یک نمونه بر اساس تمایل هر جزء به فاز متحرک در کروماتوگرافی مایع جدا می شوند. هنگامی که فاز متحرک و نمونه از یک ستون عبور می کنند، اجزای نمونه شروع به جدا شدن به نوارهایی می کنند که با طیف سنجی UV-VIS قابل تشخیص هستند.بنابراین، FPLC و HPLC دو نوع تکنیک کروماتوگرافی مایع هستند.
FPLC چیست؟
FPLC نوعی کروماتوگرافی مایع است که بیومولکول های بزرگ مانند پروتئین ها، نوکلئوتیدها و پپتیدها را خالص می کند. کروماتوگرافی مایع پروتئینی سریع (FPLC) برای اولین بار توسط شرکت Pharmacia در سال 1982 در سوئد توسعه یافت و به بازار عرضه شد. اغلب برای تجزیه و تحلیل یا خالص سازی مخلوط های پروتئینی استفاده می شود. این بر اساس اصل قرابت اجزای نمونه برای سیال متحرک (فاز متحرک) و یک ماده جامد متخلخل (فاز ثابت) صورت می گیرد. در FPLC فاز متحرک یک بافر و فاز ساکن رزینی است که از مهره ها تشکیل شده است. معمولاً از آگارز متقاطع تشکیل شده است که در یک ستون شیشه ای یا پلاستیکی استوانه ای بسته بندی شده است.
شکل 01: دستگاه FLPC (کروماتوگرافی مایع پروتئینی سریع)
در بیشتر استراتژی های FLPC، از رزین تبادل یونی استفاده می شود. بنابراین، پروتئین مورد نظر با یک برهمکنش بار به رزین متصل می شود. تکنیک FLPC همچنین از دو بافر استفاده می کند: بافر 1 (بافر در حال اجرا) و بافر 2 (بافر شستشو). در ابتدا، هنگامی که بافر و مخلوط نمونه از ستون عبور می کنند، پروتئین مورد نظر در مخلوط با یک برهمکنش بار به رزین متصل می شود. اما پروتئین مورد نظر تجزیه می شود و زمانی که بافر شستشو در انتهای فرآیند از ستون عبور می کند، به محلول در بافر شستشو برمی گردد. بعداً محلول (شوینده حاوی پروتئین مورد نظر) از دو آشکارساز عبور می کند که غلظت نمک و غلظت پروتئین را اندازه گیری می کند. همانطور که هر پروتئین شسته می شود، به عنوان یک "پیک" در طول تشخیص ظاهر می شود و می تواند برای استفاده بیشتر جمع آوری شود.
HPLC چیست؟
HPLC نوعی کروماتوگرافی مایع است که ترکیبات با وزن مولکولی کوچک را جدا می کند. در سال 1969، اولین HPLC توسط شرکت Waters، ایالات متحده آمریکا تولید شد.در کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC)، یک مخلوط نمونه (آنالیت) در یک حلال (فاز متحرک) از طریق یک ستون با مواد بسته بندی کروماتوگرافی (فاز ثابت) با فشار بالا پمپ می شود. مخلوط نمونه توسط یک جریان گاز حامل متحرک هلیوم یا نیتروژن حمل می شود.
شکل 02: HPLC (کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا)
اجزای موجود در مخلوط نمونه که کمترین میزان برهمکنش را با فاز ساکن یا بیشترین میزان برهمکنش را با فاز متحرک دارند، سریعتر از ستون خارج می شوند. از طرفی اجزایی در مخلوط نمونه که بیشترین میزان برهمکنش را با فاز ساکن و یا کمترین برهمکنش را با فاز متحرک داشته باشند، کندتر از ستون خارج می شوند. بر اساس اصل برهمکنش فوق، اجزای مخلوط نمونه را می توان جدا کرد.علاوه بر این، آشکارساز ابزار، هر جزء از مخلوط نمونه را که از ستون خارج می‌شود، شناسایی می‌کند. HPLC برای بازرسی نمونه های محیطی و بیولوژیکی از نظر وجود یا عدم وجود ترکیبات شناخته شده مانند داروها، سموم یا آفت کش ها استفاده می شود. در صنایع مختلف مانند داروسازی، محیط زیست، پزشکی قانونی و شیمیایی استفاده می شود.
شباهت های FPLC و HPLC چیست؟
- FPLC و HPLC انواعی از کروماتوگرافی مایع هستند.
- هر دو برای جداسازی و شناسایی نمونه های بیولوژیکی استفاده می شوند.
- آنها یک فاز متحرک مایع و یک فاز ثابت جامد دارند.
- هر دو تکنیک از یک ستون برای عبور از نمونه استفاده می کنند.
- این تکنیک ها از پمپ ها، آشکارسازها، دریچه ها و نرم افزار برای جداسازی و تشخیص نمونه استفاده می کنند.
تفاوت بین FPLC و HPLC چیست؟
FPLC نوعی کروماتوگرافی مایع است که برای خالص سازی بیومولکول های بزرگ مانند پروتئین ها، نوکلئوتیدها و پپتیدها استفاده می شود. HPLC نوعی کروماتوگرافی مایع است که برای جداسازی ترکیبات با وزن مولکولی کوچک استفاده می شود. بنابراین، این تفاوت اصلی بین FPLC و HPLC است. علاوه بر این، FPLC از مانیتورهای pH و رسانایی و همچنین به عنوان جمع کننده کسری استفاده می کند. در مقابل، HPLC از نمایشگرهای pH و رسانایی و کلکتورهای کسر استفاده نمی کند.
اینفوگرافیک زیر تفاوت های بیشتری را بین FPLC و HPLC به صورت جدولی فهرست می کند.
خلاصه - FPLC در مقابل HPLC
کروماتوگرافی یک تکنیک تحلیلی آزمایشگاهی است که برای جداسازی اجزا از یک مخلوط استفاده می شود. به چند نوع تقسیم می شود مانند کروماتوگرافی ستونی، کروماتوگرافی گازی، کروماتوگرافی مایع، کروماتوگرافی تبادل یونی و غیره که FPLC و HPLC دو نوع تکنیک کروماتوگرافی مایع هستند. FPLC نوعی کروماتوگرافی مایع است که برای خالص سازی بیومولکول های بزرگ مانند پروتئین ها، نوکلئوتیدها و پپتیدها استفاده می شود. از طرف دیگر HPLC نوعی کروماتوگرافی مایع است که برای جداسازی ترکیبات با وزن مولکولی کوچک استفاده می شود.بنابراین، این خلاصه ای از تفاوت بین FPLC و HPLC است.
