تفاوت اصلی بین BCA و سنجش برادفورد این است که سنجش BCA زمان‌بر و دقت کمتری دارد، در حالی که سنجش برادفورد سریع و دقیق است.
BCA و سنجش برادفورد دو روش سنجش برای تعیین غلظت پروتئین هستند. این دو سنجش دارای اصول مختلف سنجش و تفاوت در دقت آنها هستند.
سنجش BCA چیست؟
سنجش BCA یا سنجش بیسینکونیک اسید یک سنجش بیوشیمیایی مفید برای تعیین غلظت کل پروتئین در محلول است. این روش همچنین به نام اختراع آن، Paul K. Smith، به نام سنجش اسمیت نامگذاری شده است. این روش تحلیلی شباهت هایی به روش پروتئین لوری، سنجش پروتئین برادفورد یا معرف بیورت نشان می دهد.ما می‌توانیم غلظت کل پروتئین را در یک نمونه معین از طریق تغییر رنگ محلول نمونه مشاهده کنیم که از سبز به بنفش می‌رود. این تغییر رنگ متناسب با محتوای پروتئین رخ می دهد. پس از آن می‌توانیم از یک تکنیک رنگ‌سنجی برای آنالیز شدت رنگ و محتوای پروتئین در نمونه استفاده کنیم.
روش تخمین پروتئین BCA
هنگامی که مکانیسم سنجش BCA را در نظر می گیریم، محلول معمولی BCA حاوی محلول بسیار قلیایی با pH تقریباً 25/11 است و مواد تشکیل دهنده این محلول شامل بیسینکونیک اسید، کربنات سدیم، بی کربنات سدیم، تارتارات سدیم و پنتا هیدرات سولفات مس (II). این سنجش در درجه اول به دو واکنش شیمیایی بستگی دارد: کاهش مس (II) به مس (I) توسط پیوندهای پپتیدی در پروتئین و کیلاسیون دو مولکول اسید بیسینکونیک با یون مس (I) که منجر به ایجاد یک کمپلکس بنفش رنگ می شود که می تواند نور را در طول موج 562 نانومتر جذب می کند. در واکنش اول، مقدار مس (II) کاهش یافته توسط پیوندهای پپتیدی با مقدار پروتئین موجود در نمونه متناسب است.
سنجش برادفورد چیست؟
روش برادفورد یک روش تحلیلی طیف‌سنجی است که برای اندازه‌گیری غلظت پروتئین در محلول مفید است. این روش توسط ماریون ام. برادفورد در سال 1976 توسعه یافت و روشی نسبتاً سریع و دقیق است.
واکنش رنگی پروتئین و معرف برادفورد
می توانیم از این روش برای تعیین غلظت پروتئین در نمونه استفاده کنیم. واکنش شیمیایی که در نمونه طی این آزمایش انجام می‌شود، صرفاً به ترکیب اسید آمینه پروتئین موجود در نمونه بستگی دارد.
روش برادفورد برآورد پروتئین
هنگامی که روش این سنجش را در نظر می گیریم، این یک سنجش پروتئین رنگ سنجی است که بر اساس تغییر جذب رنگ به نام Coomassie Brilliant Blue G-250 است. به طور کلی این رنگ به سه شکل آنیونی (آبی)، خنثی (سبز) و کاتیونی (قرمز) وجود دارد. بنابراین در شرایط اسیدی رنگ از قرمز به آبی تغییر رنگ می دهد. این به دلیل اتصال پروتئین با رنگ است. در مقابل، اگر پروتئینی برای اتصال با رنگ وجود نداشته باشد، تغییر رنگ ظاهر نمی شود، محلول به رنگ قرمز قهوه ای می رسد. این رنگ قادر به تشکیل یک کمپلکس قوی و غیرکووالانسی با گروه کربوکسیل پروتئین از طریق نیروهای واندروال و جاذبه های الکترواستاتیکی است.
تفاوت بین BCA و سنجش برادفورد چیست؟
BCA و سنجش برادفورد دو روش سنجش برای تعیین غلظت پروتئین هستند. این دو روش دارای اصول سنجش متفاوت و تفاوت در دقت آنها هستند. تفاوت کلیدی بین سنجش BCA و برادفورد در این است که سنجش BCA وقت گیر و دقیق تر است، در حالی که سنجش برادفورد سریع و دقیق است.
اینفوگرافیک زیر تفاوت های بین BCA و سنجش برادفورد را به صورت جدولی خلاصه می کند.
خلاصه - BCA vs Bradford Assay
سنجش BCA یا سنجش بیسینکونیک اسید یک سنجش بیوشیمیایی مفید برای تعیین غلظت کل پروتئین در محلول است. سنجش برادفورد یک روش تحلیلی طیف‌سنجی است که برای اندازه‌گیری غلظت پروتئین در محلول مفید است. تفاوت کلیدی بین سنجش BCA و برادفورد این است که BCA زمان‌بر و دقت کمتری دارد، در حالی که سنجش برادفورد سریع و دقیق است.
