تبدیل در مقابل انتقال
تبدیل و ترانسفکشن دو تکنیک ساده هستند که برای معرفی یک ژن خارجی به سلول میزبان استفاده می شوند. با این حال، این تکنیک ها به نوع سیستم میزبان یا بردار بستگی دارد.
تبدیل سلولی چیست؟
تبدیل تکنیکی است که برای وارد کردن ژن ها به سلول های مخمر و باکتریایی استفاده می شود. این تکنیک معمولاً باعث تغییرات ارثی در ژن ها می شود و در نتیجه بیان ژن دائمی است. تبدیل باکتری برای اولین بار در سال 1928 توسط فردریک گریفیث معرفی شد. سپس در اوایل دهه 1970، این تکنیک در E.کولی. در طی فرآیند تبدیل E.coli، سلول ها در محلول یخی کلرید کلسیم خیس می شوند. این مرحله سلول های E.coli را توانمند می کند. پس از آن، سلول های صالح با DNA پلاسمید مخلوط شده و به مدت 20-30 دقیقه روی یخ انکوبه می شوند. سپس یک شوک حرارتی کوتاه به منظور امکان انتقال DNA به سلول داده می شود. در نهایت، سلول‌ها در آبگوشت غذایی قرار می‌گیرند و در دمای 37 درجه سانتی‌گراد به مدت 60 تا 90 دقیقه انکوبه می‌شوند تا پلاسمیدها ایجاد شوند. پس از انجام موفقیت آمیز این مراحل، سلول های تبدیل شده را می توان روی محیط مناسبی برای تکثیر سلول ها قرار داد. از آنجایی که تبدیل به عنوان یک تکنیک ناکارآمد در نظر گرفته می شود، نمی توان از آن برای تهیه بانک های کلون استفاده کرد.
ترانسفکشن سلولی چیست؟
ترانسفکشن روشی برای وارد کردن یک ژن خارجی معمولاً به سلول های پستانداران است. دو روش ترانسفکشن وجود دارد. یعنی ترانسفکشن گذرا و ترانسفکشن پایدار. در انتقال گذرا، بیان ژن برای مدت زمان محدودی در دسترس است. بنابراین، تغییر ژن باعث بیان موقت می شود.این روش ترانسفکشن ساده و سریع است. از این رو می توان از آن به طور معمول استفاده کرد. یکی از اشکالات ترانسفکشن گذرا، دشواری استفاده از سیستم های سنتز پروتئین در مقیاس بزرگ است.
در طول ترانسفکشن پایدار، یک ژن هدف در ژنوم سلول میزبان ادغام می شود و بنابراین بیان ژن بر خلاف ترانسفکشن گذرا دائمی است.
تفاوت بین تبدیل و انتقال چیست؟
• تبدیل وارد کردن یک ژن به یک سلول پروکاریوتی (باکتری و مخمر) است، در حالی که ترانسفکشن معمولاً وارد کردن یک ژن به سلول پستانداران نامیده می شود.
• تبدیل منجر به تغییر ارثی در ژن ها می شود، در حالی که ترانسفکشن می تواند منجر به بیان موقت یا تغییرات دائمی در ژن ها شود.
