تفاوت کلیدی – رنگ آمیزی گرم در مقابل اسید سریع
باکتری ها میکروارگانیسم های بسیار کوچکی هستند. آنها شفاف هستند و تشخیص آنها در شرایط زنده و بدون لکه دشوار است. بنابراین، روش‌های رنگ‌آمیزی مختلفی برای تسهیل تشخیص باکتری ایجاد می‌شوند. سه نوع اصلی از تکنیک های رنگ آمیزی وجود دارد: رنگ آمیزی ساده، رنگ آمیزی دیفرانسیل و رنگ آمیزی ساختاری. رنگ‌آمیزی افتراقی تکنیکی است که از بیش از یک رنگ برای تمایز باکتری‌ها استفاده می‌کند. رنگ آمیزی گرم و رنگ آمیزی اسید فست بیشتر به عنوان لکه های دیفرانسیل شناخته می شوند. رنگ‌آمیزی گرم یک روش رنگ‌آمیزی افتراقی است که باکتری‌ها را به دو گروه باکتری‌های گرم مثبت و باکتری‌های گرم منفی جدا می‌کند.رنگ آمیزی اسید فست یک رنگ افتراقی است که برای شناسایی موجودات اسید فست مانند مایکوباکتریوم از موجودات غیر اسیدی سریع استفاده می شود. این تفاوت اصلی بین رنگ آمیزی گرم و رنگ آمیزی اسید فست است.
Gram Stain چیست؟
رنگ آمیزی گرم یک تکنیک رنگ آمیزی افتراقی مهم است که برای شناسایی باکتری در میکروبیولوژی استفاده می شود. این تکنیک توسط باکتری شناس دانمارکی هانس کریستین گرام در سال 1884 معرفی شد. رنگ آمیزی گرم باکتری ها را به دو گروه عمده به نام های گرم مثبت و گرم منفی دسته بندی می کند که در طبقه بندی و شناسایی باکتری ها بسیار مهم هستند. میکروبیولوژیست ها رنگ آمیزی گرم را به عنوان گام اولیه در شناسایی باکتری ها در طول مطالعات خود انجام می دهند.
باکتری ها بر اساس تفاوت در دیواره سلولی آنها گروه بندی می شوند. باکتری های گرم مثبت از یک لایه پپتیدوگلیکان ضخیم در دیواره سلولی خود تشکیل شده اند در حالی که باکتری های گرم منفی از یک لایه پپتیدوگلیکان نازک در دیواره سلولی خود تشکیل شده اند. نتیجه رنگ آمیزی گرم بر اساس تفاوت در ضخامت لایه پپتیدوگلیکان دیواره سلولی خواهد بود.
رنگ آمیزی گرم با استفاده از چهار معرف مختلف انجام می شود. لکه اولیه، رنگدانه، رنگ برنده و ضد لکه. کریستال ویولت و سافرانین به ترتیب به عنوان لکه اولیه و ضد لکه و گرم ید و الکل 95 درصد به ترتیب به عنوان رنگ‌کننده و رنگ‌برنده استفاده می‌شوند. مراحل اولیه رنگ آمیزی گرمی به شرح زیر است؛
- اسمیر باکتریایی روی یک لام شیشه ای تمیز تهیه می شود، حرارت ثابت و خنک می شود.
- اسمیر به مدت 1 تا 2 دقیقه با کریستال ویولت غرق می شود.
- اسمیر با آب لوله کشی آهسته شسته می شود تا لکه های اضافی پاک شود.
- گرم ید به مدت 1 دقیقه روی اسمیر اعمال می شود.
- اسمیر با آب لوله کشی آهسته شسته می شود
- اسمیر با الکل 95 درصد به مدت 2 تا 5 ثانیه شسته می شود و با آب لوله کشی آهسته شسته می شود.
- اسمیر به مدت 1 دقیقه با سافرانین ضدآغاز می شود
- اسمیر با آب لوله کشی آهسته شسته می شود، خشک می شود و زیر میکروسکوپ مشاهده می شود.
در پایان رنگ آمیزی گرم، باکتری های گرم منفی به رنگ صورتی و باکتری های گرم مثبت در رنگ بنفش مشاهده می شوند.
شکل 01: باکتری های گرم منفی و گرم مثبت
نتیجه رنگ آمیزی گرم بر اساس ضخامت لایه پپتیدوگلیکان در دیواره سلولی آنها تعیین می شود. در مرحله رنگ‌زدایی، لکه اولیه و ماده خشک به راحتی از باکتری‌های گرم منفی پاک می‌شوند و بی‌رنگ می‌شوند، زیرا دارای یک لایه پپتیدوگلیکان نازک هستند. لکه اولیه در باکتری های گرم مثبت باقی می ماند زیرا آنها یک لایه پپتیدوگلیکان ضخیم دارند. لکه ضد برای باکتری های گرم مثبت به دلیل باقی ماندن لکه اولیه موثر نخواهد بود. بنابراین، باکتری های گرم مثبت در رنگ اصلی لکه، یعنی رنگ بنفش قابل مشاهده خواهند بود.لکه ضد باکتری های گرم منفی را لکه دار می کند و در رنگ پیکی که همان رنگ سافرانین است قابل مشاهده خواهند بود. از این رو به راحتی می توان باکتری ها را بر اساس رنگ آمیزی گرم به دو گروه تقسیم کرد و در تمایز و شناسایی باکتری ها ارزشمند است.
اسید فست چیست؟
قابلیت اسیدی خاصیت فیزیکی باکتری های خاص است، به ویژه مقاومت آنها در برابر رنگ زدایی توسط اسیدها در طی مراحل رنگ آمیزی. پس از رنگ‌آمیزی، این ارگانیسم‌ها در برابر روش‌های رنگ‌زدایی مبتنی بر اسید رقیق و یا اتانول که در بسیاری از پروتکل‌های رنگ‌آمیزی رایج است، مقاومت می‌کنند. بنابراین، نام "اسید فست" به آن موجودات داده شده است. این خاصیت به دلیل داشتن سطح بالایی از مواد مومی (اسیدهای مایکولیک) در دیواره سلولی آنها نشان داده شده است. این آزمایش برای شناسایی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس حیاتی است.
شکل 2: مایکوباکتریای اسید فست
این رنگ آمیزی اسید فست توسط Paul Ehrlich در سال 1882 ساخته شد. تکنیک اسید سریع Ehrlich توسط Ziehl-Neelsen اصلاح شد و اکنون بیشتر مورد استفاده قرار می گیرد. روش رنگ آمیزی اسید سریع شامل سه معرف مختلف است. کاربول فوشین به عنوان لکه اولیه استفاده می شود. الکل اسیدی به عنوان عامل رنگ‌زدایی استفاده می‌شود. متیلن بلو به عنوان ضد لکه استفاده می شود. روش رنگ آمیزی به شرح زیر انجام می شود.
- لکه اولیه (کاربول فوشسین) روی نمونه ثابت روی لام اعمال می شود (همه سلول ها به رنگ قرمز رنگ می شوند).
- اسلاید با بخار دادن به مدت 5 دقیقه گرم می شود که لکه ها را به درستی به داخل سلول ها هدایت می کند.
- سپس محلول رنگ‌زدایی اضافه می‌شود (این رنگ قرمز را از تمام سلول‌ها به جز باکتری‌های اسید فست حذف می‌کند).
- متیلن بلو به عنوان یک ضد لکه اضافه می شود (همه سلول های باکتریایی رنگ زدایی شده را رنگ می کند).
- باکتری های اسید فست قرمز باقی می مانند در حالی که باکتری های غیر اسیدی سریع به رنگ آبی رنگ می شوند.
شباهت‌های بین Gram Stain و Acid Fast چیست؟
- رنگ آمیزی گرم و اسید فست دو تکنیک رنگ آمیزی افتراقی هستند.
- هر دو روش باکتری ها را به دو گروه دسته بندی می کنند.
- هر دو تکنیک از دو لکه و یکی رنگ‌زدایی استفاده می‌کنند.
تفاوت بین Gram Stain و Acid Fast چیست؟
Gram Stain vs Acid Fast |
|
| رنگ‌آمیزی گرم یک روش رنگ‌آمیزی افتراقی است که باکتری‌ها را به دو گروه باکتری‌های گرم مثبت و باکتری‌های گرم منفی جدا می‌کند. | رنگ آمیزی اسید فست یک رنگ افتراقی است که برای شناسایی موجودات اسیدی سریع از موجودات غیر اسیدی استفاده می شود. |
| لکه اولیه | |
| کریستال بنفش رنگ اصلی رایج در رنگ‌آمیزی گرمی است. | کاربول فوشین لکه اصلی مورد استفاده در اسید فست است. |
| رنگ‌زدا | |
| 95% الکل به عنوان یک عامل رنگ‌زدایی در لکه‌های گرم استفاده می‌شود. | الکل اسیدی به عنوان یک عامل رنگ‌زدایی در اسید فست استفاده می‌شود. |
| Counter Stain | |
| رنگ آمیزی گرم از سافرانین به عنوان ضد لکه استفاده می کند. | رنگ اسید فست از متیلن بلو به عنوان ضد لکه استفاده می کند. |
| مشاهده | |
| باکتری های گرم منفی در رنگ پیک و باکتری های گرم مثبت در رنگ بنفش مشاهده می شوند. | باکتری های اسید فست در رنگ قرمز و باکتری های غیر اسید فست در رنگ آبی مشاهده می شوند. |
خلاصه - Gram Stain در مقابل Acid Fast
تجسم میکروارگانیسم ها در حالت زنده دشوار است. بنابراین، لکه های بیولوژیکی و روش های رنگ آمیزی به طور گسترده ای برای مطالعه خواص آنها استفاده می شود. رنگ‌آمیزی افتراقی یکی از روش‌های رنگ‌آمیزی است که برای تمایز باکتری‌ها استفاده می‌شود. رنگ آمیزی گرم و رنگ آمیزی اسید فست دو تکنیک رنگ آمیزی افتراقی هستند. رنگ آمیزی گرم باکتری های گرم منفی و باکتری های گرم مثبت را بر اساس ضخامت دیواره سلولی آنها متمایز می کند. رنگ آمیزی اسید فست باکتری های اسید فست را از باکتری های غیر اسیدی بر اساس محتوای اسید مایکولیک در دیواره سلولی متمایز می کند. این تفاوت بین رنگ آمیزی اسید فست و رنگ آمیزی گرم است.
دانلود نسخه PDF Gram Stain vs Acid Fast
می توانید نسخه PDF این مقاله را دانلود کنید و طبق یادداشت نقل قول برای اهداف آفلاین از آن استفاده کنید. لطفاً نسخه PDF را از اینجا دانلود کنید تفاوت بین رنگ آمیزی گرم و اسید سریع.
