تفاوت کلیدی - ایمونوفلورسانس در مقابل ایمونوهیستوشیمی
تشخیص بیماری، که از روش‌های بیولوژیکی مولکولی استفاده می‌کند، به یک حوزه نوظهور از فناوری آزمایشگاه بالینی تبدیل شده است. این شامل تمام آزمایش‌ها و روش‌های شناسایی یک بیماری و درک علت بیماری با تجزیه و تحلیل DNA، RNA یا پروتئین‌های بیان‌شده در یک ارگانیسم است. پیشرفت های سریع در تشخیص مولکولی، تحقیقات اساسی در مورد بیماری های واگیر و غیرواگیر را ممکن ساخته است. اینها برای تعیین تغییرات در توالی یا سطح بیان در ژن‌ها یا پروتئین‌های مهم درگیر در بیماری استفاده می‌شوند. ایمونوفلورسانس (IF) و ایمونوهیستوشیمی (IHC) دو تکنیک پرکاربرد در زیست شناسی سرطان هستند. IF نوعی IHC است که در آن از روش تشخیص فلورسانس برای تجزیه و تحلیل آنتی بادی های مونوکلونال و پلی کلونال استفاده می شود، در حالی که IHC از روش های شیمیایی برای تشخیص آنتی بادی های مونوکلونال و پلی کلونال استفاده می کند. این تفاوت اصلی بین IF و IHC است.
ایمونوفلورسانس (IF) چیست؟
ایمونوفلورسانس یک تکنیک تشخیصی است که در آن آنتی بادی‌های مورد استفاده در سنجش با استفاده از رنگ‌های فلورسنت یا پروتئین‌های فلورسنت برای هدف شناسایی برچسب‌گذاری می‌شوند. آنتی‌بادی‌های ثانویه نشان‌دار می‌توانند منجر به سیگنال‌های پس‌زمینه ناخواسته شوند. بنابراین، تکنیک IF بر اساس برچسب گذاری خود آنتی بادی اولیه در حال حاضر به منظور جلوگیری از سیگنال های ناخواسته در طول تشخیص است. از طریق این تکنیک، از اتصال غیر اختصاصی بین آنتی بادی اولیه و ثانویه جلوگیری می‌شود و از آنجایی که هیچ مرحله انکوباسیون ثانویه وجود ندارد، سریع‌تر است. کیفیت داده نیز بهبود یافته است.
شکل 01: رنگ‌آمیزی ایمونوفلورسانس مضاعف برای BrdU، NeuN و GFAP
فلوروکروم ها یا رنگ های فلورسنت ترکیباتی هستند که می توانند تشعشعات را جذب کنند، ترجیحاً اشعه ماوراء بنفش که برانگیخته می شود. هنگامی که ذرات از حالت برانگیخته به حالت پایه می رسند، تشعشعاتی از خود ساطع می کنند که توسط یک آشکارساز گرفته و شناسایی می شود تا یک طیف تشکیل شود. بسیار مهم است که برچسب فلورسنت برای واکنش خاص سازگار و پایدار باشد و برای به دست آوردن نتایج دقیق باید به درستی با آنتی بادی کونژوگه شود. یکی از پرکاربردترین فلوئوروکروم ها فلورسئین ایزوتیوسیانات (FITC) است که به رنگ سبز است و به ترتیب طول موج های جذب و انتشار به ترتیب 490 نانومتر و 520 نانومتر است. رودامین، عامل دیگری که در IF مورد استفاده قرار می‌گیرد، قرمز رنگ است و دارای طول موج‌های حداکثر جذب و انتشار متمایز ۵۵۳ نانومتر و ۶۲۷ نانومتر است.
ایمونوهیستوشیمی (IHC) چیست؟
IHC یک روش آزمایش مولکولی است که به منظور شناسایی و تأیید وجود آنتی ژن در سلول هدف انجام می شود. سلول هدف می تواند یک ذره عفونی، یک پاتوژن میکروبی یا یک سلول تومور بدخیم باشد. IHC از آنتی بادی های مونوکلونال و پلی کلونال برای تعیین حضور آنتی ژن های موجود در سطح سلولی سلول های هدف استفاده می کند. این تکنیک مبتنی بر اتصال آنتی ژن به آنتی بادی است. یک نشانگر تشخیص به این آنتی بادی ها کونژوگه می شود تا وجود یا عدم وجود آنتی ژن خاص را تشخیص دهد. این نشانگرها می‌توانند نشانگرهای شیمیایی مانند آنزیم‌ها، آنتی‌بادی‌های دارای برچسب فلورسنت یا آنتی‌بادی‌های برچسب‌دار رادیویی باشند.
شکل 02: برش مغز موش رنگ آمیزی شده توسط ایمونوهیستوشیمی
محبوب ترین کاربرد IHC در زیست شناسی سلول های سرطانی برای شناسایی وجود تومورهای بدخیم است، اما برای تشخیص بیماری های عفونی نیز استفاده می شود.
شباهت های بین ایمونوفلورسانس و ایمونوهیستوشیمی چیست؟
- ایمونوفلورسانس و ایمونوهیستوشیمی تحت شرایط in vitro انجام می شود.
- هر دو تکنیک مبتنی بر آنتی ژن-آنتی بادی هستند
- هر دو تکنیک بسیار سریع هستند.
- نتایج تکنیک ها قابل تکرار هستند.
- هر دو کیفیت داده بهبود یافته اند.
- این تکنیک ها در تشخیص سرطان و بیماری های عفونی استفاده می شود.
تفاوت بین ایمونوفلورسانس و ایمونوهیستوشیمی چیست؟
ایمونوفلورسانس در مقابل ایمونوهیستوشیمی |
|
| IF یک تکنیک تشخیص است که در آن آنتی بادی های مورد استفاده در سنجش با استفاده از رنگ های فلورسنت یا پروتئین های فلورسنت برای تشخیص برچسب گذاری می شوند. | IHC یک تکنیک تشخیص است که در آن آنتی بادی های مورد استفاده در سنجش با استفاده از مواد شیمیایی یا عناصر رادیواکتیو برای تشخیص برچسب گذاری می شوند. |
| دقت | |
| دقت در تکنیک IF در مقایسه با IHC بالاتر است. | دقت در IHC کمتر است. |
| ویژگی | |
| اگر مشخص تر است. | IHC کمتر اختصاصی است. |
خلاصه - ایمونوفلورسانس در مقابل ایمونوهیستوشیمی
مکانیسم‌های مولکولی تغییرات زیادی را در زمینه پزشکی به وجود آورده است و باعث ایجاد روش‌های پیشرفته آزمایش مولکولی شده است که انقلاب‌هایی در زمینه تشخیص به وجود آورده است.این اختراعات منجر به شناسایی و تایید سریع و دقیق بیماری شده و از این طریق امکان تجویز و تولید موفق داروها را فراهم کرده است. این تکنیک ها همچنین در فارماکولوژی به منظور یافتن اهداف داروها و تایید خواص فارماکوکینتیکی دارو در طول متابولیسم دارو مورد استفاده قرار می گیرند. IF و IHC دو روش تشخیصی هستند که مبتنی بر مفهوم اتصال آنتی ژن و آنتی بادی هستند، اگرچه نحوه تشخیص در هر دو روش متفاوت است. IF از اصل فلورسانس برای تشخیص آنتی ژن و IHC از مفهوم کونژوگاسیون شیمیایی برای تشخیص آنتی ژن استفاده می کند. این تفاوت بین IF و IHC است.
دانلود نسخه PDF ایمونوفلورسانس در مقابل ایمونوهیستوشیمی
می توانید نسخه PDF این مقاله را دانلود کنید و طبق یادداشت نقل قول برای اهداف آفلاین از آن استفاده کنید. لطفاً نسخه PDF را از اینجا دانلود کنید تفاوت بین ایمونوفلورسانس و ایمونوهیستوشیمی.
