تفاوت اصلی بین ایمونوفلورسانس مستقیم و غیرمستقیم این است که ایمونوفلورسانس مستقیم از یک آنتی بادی منفرد استفاده می کند که علیه هدف مورد نظر کار می کند در حالی که ایمونوفلورسانس غیرمستقیم از دو آنتی بادی برای برچسب زدن هدف مورد نظر استفاده می کند.
ایمونوفلورسانس یا تصویربرداری سلولی تکنیکی است که برای برچسب گذاری یک آنتی ژن هدف خاص با فلوروفور استفاده می شود. در اینجا، فلوروفور یک ترکیب شیمیایی فلورسنت است که می‌تواند پس از برانگیختگی نور، دوباره نور ساطع کند. هنگامی که فلوروفور به آنتی ژن هدف متصل می شود، امکان تشخیص مولکول هدف در نمونه را فراهم می کند. برای توصیف بیشتر، هنگامی که یک آنتی ژن به یک آنتی بادی خاص متصل می شود، می توان آن را با فلوروفورها کونژوگه کرد.از این رو، تشخیص وجود آنتی ژن هدف در نمونه هنگام مشاهده زیر میکروسکوپ فلورسانس آسان است.
علاوه بر این، دو نوع ایمونوفلورسانس وجود دارد. ایمونوفلورسانس مستقیم و غیر مستقیم تفاوت بین ایمونوفلورسانس مستقیم و غیرمستقیم عمدتاً در تعداد آنتی بادی های مورد استفاده و ترکیب فلوروفور نهفته است. یعنی در ایمونوفلورسانس مستقیم، فلوروفور به طور مستقیم به آنتی بادی اولیه کونژوگه می شود در حالی که در ایمونوفلورسانس غیرمستقیم، فلوروفور با آنتی بادی ثانویه مزدوج می شود.
ایمونوفلورسانس مستقیم چیست؟
ایمونوفلورسانس از آنتی بادی ها برای شناسایی آنتی ژن های هدف خاص استفاده می کند. ایمونوفلورسانس مستقیم یکی از دو نوع ایمونوفلورسانس است. در ایمونوفلورسانس مستقیم، یک آنتی بادی منفرد (آنتی بادی اولیه) درگیر می شود و فلوروفور مستقیماً با آنتی بادی اولیه کونژوگه می شود. پس از اتصال آنتی بادی با آنتی ژن هدف، فلوروفور فلورسانس منتشر می کند که با میکروسکوپ فلورسانس قابل تشخیص است.
شکل 01: ایمونوفلورسانس مستقیم
با این حال، ایمونوفلورسانس مستقیم یک روش گران است زیرا آنتی بادی های کونژوگه اولیه در مقایسه با آنتی بادی های ثانویه گران هستند. با این وجود، این شامل یک مرحله اضافی نیست، بنابراین، یک تکنیک کوتاهتر است. علاوه بر این، اتصالات غیر اختصاصی در ایمونوفلورسانس مستقیم کاهش می یابد. از این رو، واکنش متقابل گونه ها کم است. اما در تشخیص، حساسیت ایمونوفلورسانس مستقیم در مقایسه با ایمونوفلورسانس غیرمستقیم ضعیف است.
ایمونوفلورسانس غیرمستقیم چیست؟
ایمونوفلورسانس غیرمستقیم نوع دوم ایمونوفلورسانس است که شامل دو نوع آنتی بادی مانند آنتی بادی های اولیه و ثانویه در برچسب گذاری آنتی ژن هدف می شود.در این روش فلوروفور با آنتی بادی ثانویه کونژوگه می شود. از این رو، این تکنیک شامل یک مرحله اضافی است.
شکل 02: ایمونوفلورسانس
با این حال، حساسیت در این روش بالا است زیرا می توان چندین فلوروفور را به آنتی بادی های ثانویه کونژوگه کرد و تشخیص را آسان تر می کند. علاوه بر این، ایمونوفلورسانس غیرمستقیم به دلیل این واقعیت که کونژوگه آنتی‌بادی‌های ثانویه ارزان‌تر و آسان‌تر است، ارزان‌تر است. در مقایسه با ایمونوفلورسانس مستقیم، واکنش متقاطع گونه ها در روش غیرمستقیم زیاد است.
شباهت های بین ایمونوفلورسانس مستقیم و غیرمستقیم چیست؟
- آنها دو نوع تکنیک ایمونوفلورسانس هستند.
- آنتی بادی های اولیه و فلوروفور در هر دو روش دخالت دارند.
- همچنین واکنش آنتی ژن-آنتی بادی در هر دو روش رخ می دهد.
- علاوه بر این، ایمونوفلورسانس مستقیم و غیرمستقیم از میکروسکوپ فلورسانس برای تشخیص آنتی ژن استفاده می کند.
تفاوت بین ایمونوفلورسانس مستقیم و غیرمستقیم چیست؟
ایمونوفلورسانس می تواند مستقیم یا غیرمستقیم بر اساس کونژوگاسیون فلوروفور با آنتی بادی های مورد استفاده باشد. در ایمونوفلورسانس مستقیم، فلوروفور با آنتی بادی اولیه، که همان آنتی بادی منفرد است که در این تکنیک دخالت دارد، کونژوگه می شود. بر خلاف آن، در ایمونوفلورسانس غیرمستقیم، فلوروفور با آنتی بادی ثانویه، که یکی از دو نوع آنتی بادی است که در این تکنیک دخالت دارند، کونژوگه می شود. از این رو، تفاوت اصلی بین ایمونوفلورسانس مستقیم و غیرمستقیم، نوع آنتی بادی است که با فلوروفور ترکیب می شود.
اینفوگرافیک زیر مقایسه ای از تفاوت بین ایمونوفلورسانس مستقیم و غیرمستقیم را ارائه می دهد.
خلاصه - ایمونوفلورسانس مستقیم در مقابل غیر مستقیم
ایمونوفلورسانس تکنیکی است که برای تشخیص وجود آنتی ژن های خاص در نمونه استفاده می شود. این تکنیک از آنتی بادی های خاص استفاده می کند. بنابراین، در این، آنتی بادی ها با فلوروفورها ترکیب می شوند تا آنها را با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت شناسایی کنند. علاوه بر این، دو نوع ایمونوفلورسانس به نام‌های ایمونوفلورسانس مستقیم و غیرمستقیم وجود دارد. ایمونوفلورسانس مستقیم شامل یک آنتی بادی منفرد و فلوروفور است که مستقیماً به این آنتی بادی کونژوگه شده است. ایمونوفلورسانس غیر مستقیم شامل دو آنتی بادی است. اولیه و ثانویه و فلوروفور کونژوگه به آنتی بادی ثانویه.از آنجایی که چندین آنتی بادی ثانویه می توانند با یک آنتی بادی اولیه متصل شوند و چندین فلوروفور می توانند با آنتی بادی های ثانویه کونژوگه شوند، ایمونوفلورسانس غیرمستقیم روشی حساس تر از روش مستقیم است. علاوه بر این، روش غیر مستقیم هزینه کمتری نسبت به روش مستقیم دارد. بنابراین، این تفاوت بین ایمونوفلورسانس مستقیم و غیرمستقیم است.
