تفاوت کلیدی – تریپسینیزاسیون گرم در مقابل سرد
تریپسینیزاسیون گرم و سرد دو روشی هستند که در جداسازی آنزیمی سلول ها در کشت سلول حیوانی مورد استفاده قرار می گیرند. تفاوت اصلی بین تریپسین شدن گرم و سرد، همانطور که از نام ها پیداست، به دمایی بستگی دارد که در آن تریپسین برای تجزیه سلولی اضافه می شود. تریپسینیزاسیون گرم در شرایط دمای بالاتر (36.5 - 37 0C) در حالی که تریپسینیزاسیون سرد در شرایط دمای پایین انجام می شود.
در طول فرآیند کشت سلولی اولیه سلولهای حیوانی، سه روش اصلی مورد استفاده قرار گرفته و موفقیت آمیز بودن آنها ثابت شده است.این سه روش شامل جداسازی مکانیکی سلول‌ها، تجزیه آنزیمی سلول‌ها و تکنیک ریزنمونه اولیه است. تجزیه آنزیمی سلول ها منجر به جداسازی سلول ها می شود و توسط آنزیم تجزیه کننده پروتئین تریپسین انجام می شود. بنابراین، این فرآیند به عنوان تریپسینیزاسیون شناخته می شود. تریپسینیزاسیون را می توان تحت دو شرایط مختلف تریپسینیزاسیون گرم و تریپسینیزاسیون سرد انجام داد. تریپسینیزاسیون گرم روشی برای درمان سلول ها با تریپسین در شرایط گرم در دمای 36.5 تا 37 0C است. تریپسینیزاسیون سرد فرآیند تصفیه تریپسین است که در شرایط سردتر و ترجیحاً در یخ و دمای بسیار پایین انجام می شود.
Trypsinization گرم چیست؟
تریپسینیزاسیون می تواند برای جداسازی اجزای سلولی به منظور جداسازی سلول ها برای تولید یک کشت سلولی اولیه انجام شود. تریپسین یک آنزیم تجزیه پروتئین است و مخلوط آنزیمی مورد استفاده در تریپسینیزاسیون می تواند یک عصاره خام یا یک محصول خالص باشد.گفته می شود که عصاره خام در لیز پروتئین و تجزیه سلولی کارآمدتر است زیرا حاوی آنزیم های تخریب کننده دیگری است.
تریپسینیزاسیون گرم رایج ترین روش آنزیمی مورد استفاده برای تجزیه سلولی است که در شرایط دمای بالاتر انجام می شود. قبل از درمان با تریپسینیزاسیون، بافت مورد نظر به قطعات کوچکتر خرد می شود. فرآیند تفکیک آسان را تسهیل می کند. سپس بافت خرد شده در یک محیط مخصوص به نام محیط نمک پایه دیسکشن شسته می شود.
پس از اتمام مرحله شستشو، سلول ها به یک فلاسک حاوی آنزیم فعال که تریپسین است تبدیل می شوند. از آنجایی که این تکنیک مستلزم یک پروتکل تریپسینیزاسیون گرم است، تریپسین در دمای حدود 37 0C برای حدود چهار ساعت قرار می گیرد.
شکل 01: تریپسین
محتویات با استفاده از روش‌های سانتریفیوژ برای سهولت پروتکل و سرعت بخشیدن به فرآیند تفکیک مخلوط و هم‌زن می‌شوند. پس از رسیدن به زمان توصیه شده، سلول ها را می توان از مایع رویی استخراج کرد. سلول های مشتق شده از مایع رویی سپس در دما و زمان خاصی انکوبه می شوند.
تریپسینیزاسیون سرد چیست؟
تریپسینیزاسیون سرد نوع دیگری از تریپسینیزاسیون است که در شرایط سرد انجام می شود. در این تکنیک سلول هایی که خرد شده و شسته می شوند در ویال هایی روی یخ قرار می گیرند و سپس با تریپسین آغشته می شوند. دوره خیساندن بسیار طولانی تر است - حدود 6 تا 24 ساعت.
پس از اتمام فرآیند خیساندن، تریپسین از لیزات سلولی خارج می شود و قطعات بافت بیشتر در دمای 37 0C برای حدود 20 تا 30 دقیقه انکوبه می شوند. از هم گسیختگی سلول ها با پیپت کردن مکرر مخلوط بافت ایجاد می شود.این به سلول ها اجازه می دهد تا از غشاء جدا شوند و به مایع رویی بیایند. هنگامی که سلول ها در مایع رویی قرار گرفتند، انکوبه می شوند و در دما و دوره زمانی مورد نظر رشد می کنند.
روش تریپسینیزاسیون سرد چندین مزیت دارد
- بازده سلولهای زنده بیشتر به عنوان آسیب سلولی به حداقل می رسد. آسیب سلولی با استفاده نکردن از مراحل سانتریفیوژ به حداقل می رسد.
- روش بسیار راحت.
- زحمت کمتر.
محدودیت اصلی روش تریپسینیزاسیون سرد این است که مقادیر زیاد را نمی توان در یک نمونه استفاده کرد.
شباهت‌های بین تریپسینیزاسیون گرم و سرد چیست؟
- هر دو فرآیند تریپسینیزاسیون گرم و سرد از آنزیم تریپسین برای تجزیه سلول ها استفاده می کنند.
- هر دو فرآیند تریپسینیزاسیون گرم و سرد در روش های کشت سلولی برای جداسازی سلول ها استفاده می شوند.
- در هر دو روش درمان تریپسینیزاسیون سرد و گرم، سلول ها از مایع رویی مشتق می شوند.
تفاوت بین تریپسینیزاسیون گرم و سرد چیست؟
تریپسینیزاسیون گرم در مقابل سرد |
|
| تریپسینیزاسیون گرم روشی برای درمان سلول ها با تریپسین در شرایط گرم در دمای 36.5 تا 37 0 است. | تریپسینیزاسیون سرد فرآیند تصفیه تریپسین است که در شرایط سردتر و ترجیحاً در یخ و دمای بسیار پایین انجام می شود. |
| پروتکل | |
| تکه های دستمال خرد شده در دمای 37 0C به طور مداوم در طول عمل حفظ می شوند. | تکه های دستمال خرد شده ابتدا در دمای سرد نگهداری می شوند و سپس در دمای 37 0 نگهداری می شوند. |
| دما | |
| تریپسینیزاسیون گرم در 36.5 تا 37 رخ می دهد 0 | تریپسینیزاسیون سرد در دمای سرد یخ رخ می دهد. |
| زمان مصرف | |
| زمان کمتری برای کل فرآیند (حدود 4 ساعت) تریپسینیزاسیون گرم مورد نیاز است. | زمان طولانی تری (حدود 6 تا 24 ساعت) برای تریپسینیزاسیون سرد مورد نیاز است. |
| بازده سلولهای زنده | |
| تریپسینیزاسیون گرم کم است. | دارای تریپسینیزاسیون سرد بالا. |
| استفاده از سانتریفیوژ | |
| سانتریفیوژ برای جداسازی سلول ها در تریپسینیزاسیون گرم مورد نیاز است. | در تریپسینیزاسیون سرد نیازی به سانتریفیوژ نیست. |
| مقدار اولیه بافت برای تریپسینیزاسیون | |
| مقدار بیشتری از بافت را می توان در تریپسینیزاسیون گرم استفاده کرد. | می توان از مقدار کمتری از بافت در تریپسینیزاسیون سرد استفاده کرد. |
| آسیب سلولی | |
| بالا به دلیل سانتریفیوژ در تریپسینیزاسیون گرم. | به دلیل تریپسینیزاسیون سرد کمتر. |
خلاصه - تریپسینیزاسیون گرم در مقابل سرد
تریپسینیزاسیون روشی برای استفاده از آنزیم تجزیه کننده پروتئین تریپسین برای جداسازی و آماده سازی کشت های سلولی اولیه در طی فرآیند کشت سلولی است. دو روش اصلی تریپسینیزاسیون بر اساس دماهای مورد استفاده در طول عمل وجود دارد. تریپسینیزاسیون گرم و سرد هستند. تریپسینیزاسیون گرم در دمای 37 0C انجام می شود در حالی که تریپسینیزاسیون سرد در شرایط سرد یخ انجام می شود.اگرچه تریپسینیزاسیون سرد زمان بیشتری برای تکمیل نیاز دارد، اما گفته می شود که عملکرد سلول های زنده بیشتری دارد. این به دلیل این واقعیت است که آسیب سلولی در تریپسینیزاسیون سرد به حداقل می رسد زیرا از مراحل سانتریفیوژ شدید استفاده نمی کند. این تفاوت بین تریپسینیزاسیون گرم و سرد است.
