تفاوت اصلی بین الایزای رقابتی و غیررقابتی این است که الایزای رقابتی از یک آنتی ژن بازدارنده استفاده می کند در حالی که الایزای غیر رقابتی از آنتی ژن بازدارنده برای سنجش استفاده نمی کند.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) یک سنجش ایمنی است که اهداف مختلفی مانند آنتی بادی ها، آنتی ژن ها، پروتئین ها و گلیکوپروتئین ها را شناسایی می کند. این یک روش سریع و ساده برای انجام است. از این رو، بیشتر برای اهداف تحقیقاتی و تشخیصی استفاده می شود. ELISA شامل استفاده از آنزیم ها و اتصال اختصاصی آنتی بادی و آنتی ژن است. بر اساس نحوه انجام واکنش ها، چهار نوع الایزا وجود دارد: الایزا مستقیم، الایزا غیرمستقیم، الایزای ساندویچی و الایزای مهاری.الایزای مستقیم، غیرمستقیم و ساندویچی از انواع الایزای غیررقابتی هستند در حالی که الایزای مهاری نوعی الایزای کامل است. هدف اصلی این مقاله بحث درباره تفاوت بین ELISA رقابتی و غیررقابتی است.
الایزای رقابتی چیست؟
ELISA رقابتی غلظت آنتی ژن را در نمونه از طریق تشخیص تداخل سیگنال اندازه گیری می کند. در اینجا، آزمایش از یک آنتی ژن بازدارنده استفاده می کند. از این رو، این یک نوع ELISA مهاری است. در طی این روش، آنتی ژن های موجود در نمونه با آنتی ژن مرجع انتخاب شده برای اتصال به مقدار خاصی از آنتی بادی نشاندار شده رقابت می کنند. علاوه بر این، این روش با انکوباسیون نمونه، با مقدار اضافی آنتی بادی نشاندار آغاز می شود. همچنین، آنتی ژن مرجع باید از قبل روی یک صفحه آزمایش چند چاهی پوشش داده شود. سپس مخلوط نمونه باید به صفحه سنجش حاوی آنتی ژن مرجع اضافه شود. آنتی بادی های آزاد بسته به مقدار آنتی ژن در نمونه به آنتی ژن مرجع متصل می شوند.از این رو، اگر آنتی ژن نمونه بیشتری وجود داشته باشد، آنتی ژن مرجع کمتری شناسایی خواهد شد. بنابراین، سیگنال ضعیف تری ایجاد می کند.
شکل 01: ELISA
در مقابل، وقتی نمونه حاوی مقدار کمتری آنتی ژن باشد، آنتی ژن مرجع بیشتر و بیشتر آنتی بادی ها را اشغال می کند و سیگنال قوی می دهد. از آنجایی که الایزای رقابتی هنگامی که نمونه حاوی مقدار کمی آنتی ژن باشد سیگنال قوی تری می دهد، الایزای رقابتی یک سنجش بسیار حساس است، حتی برای نمونه هایی با تعداد کمی آنتی ژن.
در برخی از کیت های رقابتی الایزا، یک آنتی ژن نشاندار به جای آنتی بادی نشاندار استفاده می شود. در اینجا، آنتی ژن نشاندار شده و آنتی ژن نمونه برای اتصال به آنتی بادی اولیه با هم رقابت خواهند کرد. به طور مشابه، زمانی که مقدار آنتی ژن در نمونه کم باشد، مقدار آنتی ژن نشاندار شده که به آنتی بادی ها متصل می شود بیشتر خواهد بود و سیگنال قوی تری ایجاد می کند.
الایزای غیررقابتی چیست؟
در میان چهار نوع الایزا، سه نوع الایزا غیررقابتی هستند. آنها الایزا مستقیم، الایزا غیر مستقیم و الایزا ساندویچ هستند. هر سه فرمت تحت اصل مشترک الایزا با تفاوت‌های جزئی در روش‌هایشان کار می‌کنند.
الایزای مستقیم از آنتی بادی اولیه با برچسب آنزیمی استفاده می کند. بنابراین نیازی به آنتی بادی ثانویه ندارد. بنابراین الایزای مستقیم سریعتر از سایر انواع الایزا است. آنتی بادی اولیه مستقیماً به آنتی ژن هدف بی حرکت موجود در پلیت متصل می شود. از این رو، واکنش آنزیم-سوبسترا انجام می شود و یک سیگنال قابل مشاهده تولید می کند.
شکل 02: ساندویچ الایزا
برخلاف الایزای مستقیم، الایزای غیرمستقیم از یک آنتی بادی اولیه نشاندار نشده و یک آنتی بادی ثانویه نشاندار آنزیمی استفاده می کند.هنگامی که آنتی بادی اولیه به آنتی ژن بی حرکت متصل می شود، آنتی بادی ثانویه به آنتی بادی اولیه متصل می شود. آنزیم موجود در آنتی بادی ثانویه با آنتی ژن واکنش نشان می دهد و یک سیگنال قابل مشاهده تولید می کند. الایزا ساندویچ با الایزا مستقیم و غیر مستقیم متفاوت است. در اینجا، آنتی بادی به دیواره صفحه سنجش بی حرکت می شود.
شباهت های بین الایزای رقابتی و غیررقابتی چیست؟
- الایزای رقابتی و غیررقابتی دو نوع روش سنجش ایمونوسوربنت هستند.
- آنها تکنیک های بسیار انعطاف پذیر و حساس هستند.
- علاوه بر این، ELISA رقابتی و غیر رقابتی، ایمونواسی مرتبط با آنزیم هستند.
- همچنین، هر دو روش به دلیل واکنش آنزیم-سوبسترا سیگنال تولید می کنند.
تفاوت بین الایزا رقابتی و غیررقابتی چیست؟
الایزای رقابتی نوعی از الایزا است که به تکمیل بین آنتی ژن آنالیت و آنتی ژن نشاندار برای مقدار محدودی از آنتی بادی خاص متکی است.از سوی دیگر، چنین رقابتی بین آنتی ژن مورد نظر و آنتی ژن مرجع در ELISA غیررقابتی وجود ندارد. بنابراین، این تفاوت اصلی بین ELISA رقابتی و غیر رقابتی است. به طور مشابه، ELISA رقابتی یک ELISA مهاری است در حالی که ELISA غیر رقابتی یک ELISA بازداری نیست. بنابراین، این نیز یک تفاوت بین ELISA رقابتی و غیر رقابتی است.
علاوه بر این، ELISA رقابتی برای اندازه گیری مقدار کم آنتی ژن مورد نظر مناسب تر است. روش حساسی است. از سوی دیگر، الایزای غیررقابتی به تعداد آنتی ژن های موجود در نمونه بستگی ندارد. بنابراین، این نیز تفاوتی بین الایزای رقابتی و غیررقابتی است.
اینفوگرافیک زیر تفاوت بین ELISA رقابتی و غیررقابتی را به طور مقایسه ای توضیح می دهد.
خلاصه - الایزای رقابتی در مقابل غیررقابتی
الایزای رقابتی و غیررقابتی دو نوع اصلی الایزا یا سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم هستند. در خلاصه کردن تفاوت بین الایزای رقابتی و غیررقابتی، الایزای رقابتی بر رقابت بین آنتی ژن مورد نظر و آنتی ژن مرجع نسبت به مقدار محدود آنتی بادی متکی است. بنابراین، ELISA رقابتی به نام ELISA مهاری نیز نامیده می شود. از سوی دیگر، ELISA غیررقابتی به رقابت بین آنتی ژن های هدف و آنتی ژن های مرجع متکی نیست. از مقدار زیادی آنتی بادی خاص نشاندار شده به سمت آنالیت مورد نظر استفاده می کند. بنابراین، این تفاوت اصلی بین ELISA رقابتی و غیر رقابتی است. الایزای مستقیم، الایزای غیرمستقیم و الایزای ساندویچی سه نوع اصلی الایزای غیررقابتی هستند.
