تفاوت کلیدی – صفحه SDS در مقابل وسترن بلات
وسترن بلات تکنیکی است که پروتئین خاصی را از نمونه پروتئین تشخیص می دهد. این تکنیک از طریق چندین مرحله کلیدی انجام می شود: الکتروفورز ژل، بلات و هیبریداسیون. الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید سدیم دودسیل سولفات (SDS Page) نوعی روش الکتروفورز ژل است که برای جداسازی پروتئین ها بر اساس اندازه آنها (وزن مولکولی) استفاده می شود. وسترن بلات یک صفحه مخصوص از یک غشای بلاتینگ است که برای انتقال همان الگوی پروتئین ها در صفحه SDS استفاده می شود. تفاوت اصلی بین SDS Page و وسترن بلات در این است که SDS Page اجازه جداسازی پروتئین ها را در یک مخلوط می دهد در حالی که وسترن بلات امکان تشخیص و تعیین کمیت یک پروتئین خاص از یک مخلوط را فراهم می کند.هر دو در مطالعات آنالیز پروتئین مفید هستند.
صفحه SDS چیست؟
صفحه SDS یک تکنیک الکتروفورز ژل است که برای جداسازی پروتئین استفاده می شود. معمولاً در بیوشیمی، ژنتیک، پزشکی قانونی و زیست شناسی مولکولی استفاده می شود. هنگامی که پروتئین ها از نمونه استخراج می شوند، روی ژل ساخته شده از SDS و پلی آکریل آمید اجرا می شوند. SDS یک شوینده آنیونی است که برای خطی کردن پروتئین ها (پروتئین های دناتوره) و ایجاد بار منفی به پروتئین های خطی شده متناسب با جرم مولکولی آنها استفاده می شود. پلی آکریل آمید به تکیه گاه جامد ژل تبدیل می شود. پروتئین های دناتوره شده که دارای بار منفی هستند از طریق ژل به سمت انتهای مثبت دستگاه مهاجرت می کنند. با توجه به اندازه پروتئین ها، سرعت مهاجرت بین پروتئین ها متفاوت است و جداسازی اتفاق می افتد. بنابراین، صفحه SDS برای جداسازی تک تک پروتئین ها بر اساس اندازه آنها مفید است.
تهیه ژل پلی آکریل آمید برای تکه تکه کردن پروتئین ها یک مرحله مهم در صفحه SDS است.غلظت صحیح پلی آکریل آمید و نوع عامل اتصال متقابل استفاده شده به شدت بر خواص فیزیکی ژل تأثیر می گذارد که باعث جداسازی واقعی پروتئین های مختلف می شود. اندازه منافذ ژل برای جداسازی موثر باید به درستی مدیریت شود. با این حال، SDS Page به عنوان یک تکنیک جداسازی پروتئین با وضوح بالا در نظر گرفته می شود.
تکنیک صفحه SDS یک محدودیت عمده در آنالیز پروتئین دارد. از آنجایی که SDS پروتئین ها را قبل از جداسازی دناتوره می کند، امکان تشخیص فعالیت آنزیمی، برهمکنش های اتصال پروتئین، کوفاکتورهای پروتئینی و غیره را نمی دهد.
شکل 01: صفحه SDS
Western Blot چیست؟
تکنیک وسترن بلات تشخیص یک پروتئین خاص از مخلوط پروتئین و اندازه گیری کمیت و وزن مولکولی پروتئین را امکان پذیر می کند.وسترن بلات غشایی است که در طی فرآیند بلات برای به دست آوردن تصویر آینه ای از الگوهای پروتئین در ژل پلی آکریل آمید SDS استفاده می شود. غشایی که برای وسترن بلات استفاده می شود بیشتر از نیتروسلولز یا پلی وینیلیدین دی فلوراید (PVDF) ساخته شده است. غشا با پروتئین منتقل شده می تواند برای شناسایی پروتئین مورد نظر استفاده شود. برای تشخیص پروتئین مورد نظر با هیبریداسیون به آنتی بادی با کیفیت بالا نیاز دارد. آنتی بادی به آنتی ژن اختصاصی خود متصل می شود و وجود آنتی ژن مورد نظر را که یک پروتئین است، آشکار می کند.
انتقال پروتئین از ژل پلی آکریل آمید SDS به وسترن بلات با الکتروبلات انجام می شود. این یک روش موثر و سریع است که باعث می شود پروتئین ها از ژل الکتروفورز شده و به غشای نیتروسلولزی (Western blot) منتقل شوند.
شکل 02: وسترن بلات
تفاوت بین SDS Page و Western Blot چیست؟
صفحه SDS در مقابل وسترن بلات |
|
| صفحه SDS یک تکنیک الکتروفورز ژل است. | Western blot تکنیکی است که بر روی یک غشاء برای تشخیص پروتئین خاصی از مخلوط انجام می شود. |
| استفاده از | |
| صفحه SDS امکان جداسازی پروتئین ها بر اساس اندازه آنها را می دهد. | Western blot امکان انتقال پروتئین روی ژل صفحه SDS را بدون تغییر الگوی آن و امکان هیبریداسیون با آنتی بادی های خاص را فراهم می کند. |
| معایب | |
| دناتوره کردن پروتئین، هزینه بالا و وجود مواد شیمیایی نوروتوکسین از معایب این روش است. | این تکنیک وقت گیر است و نیاز به یک تجربه خوب شخصی و شرایط کنترل شده خاص دارد. |
خلاصه - صفحه SDS در مقابل وسترن بلات
صفحه SDS و وسترن بلات دو روش درگیر در آنالیز پروتئین هستند. صفحه SDS امکان جداسازی آسان پروتئین ها را بر روی ژل با توجه به وزن مولکولی آنها فراهم می کند. وسترن بلات به تأیید وجود و کمیت یک پروتئین خاص از طریق هیبریداسیون با آنتی بادی های خاص کمک می کند. این تفاوت بین صفحه SDS و وسترن بلات است.
