تفاوت کلیدی - نیتروسلولز در مقابل PVDF
وسترن بلات روشی است که امکان تشخیص و تعیین کمیت پروتئین های خاص از یک نمونه پروتئین را فراهم می کند. قابلیت اطمینان این روش به انتخاب یک غشاء صحیح برای جذب پروتئین از ژل بستگی دارد. انواع مختلفی از غشاهای میکرو متخلخل وجود دارد. غشاهای نیتروسلولزی و PVDF دو غشا هستند که به دلیل ویژگی‌های ویژه‌ای که نسبت به انواع دیگر غشاها دارند، توسط محققان ترجیح داده می‌شوند. انتخاب بین نیتروسلولز یا PVDF نیز چالش دیگری در وسترن بلات است. هم نیتروسلولز و هم PVDF ظرفیت جذب پروتئین بالایی دارند.تفاوت اصلی بین غشای نیتروسلولز و PVDF در این است که غشاهای نیتروسلولزی توانایی جدا کردن آنتی بادی ها و استفاده مجدد از غشاء را برای بازیابی آنتی بادی ندارند در حالی که غشاهای PVDF دارای قابلیت جداسازی و استفاده مجدد هستند.
نیتروسلولز چیست؟
Nitrocellulose پلیمری است که از پردازش سلولز با اسید نیتریک تولید می شود و برای ساخت غشاهای ریز متخلخل در زیست شناسی مولکولی، به ویژه برای تکنیک های بلات مانند ساوترن، شمالی و وسترن بلات استفاده می شود. اندازه منافذ غشاهای نیتروسلولزی بین 3 تا 20 میکرومتر است. غشاهای ریز متخلخل نیتروسلولز تشخیص واکنش ایمونوشیمیایی روی سطح غشا را تسهیل می کنند. بنابراین، غشاهای نیتروسلولزی اغلب برای تثبیت پروتئین ها و تشخیص پروتئین های خاص در وسترن بلات استفاده می شوند. غشاهای نیتروسلولز همچنین می توانند گلیکوپروتئین ها و اسیدهای نوکلئیک را بی حرکت کنند.
غشاهای نیتروسلولزی در سنجش جریان جانبی به دلیل چندین ویژگی ترجیح داده می شوند.غشاهای نیتروسلولزی پروتئین ها را با غلظت بالایی جذب می کنند. حلال مورد استفاده برای خیس کردن غشا، جذب پروتئین غشای نیتروسلولز را کاهش نمی دهد. غشاهای نیتروسلولزی را می توان به راحتی به اندازه ژل دلخواه برش داد و با انتقال الکتریکی یا مویرگی پروتئین ها را از ژل به غشاء منتقل کرد. نیتروسلولز به جریان سریعتر پروتئین ها از طریق غشا با پتانسیل اتصال بالا اجازه می دهد. نیتروسلولز قدرت کنترل بهتری را نشان می دهد. یکی دیگر از ویژگی های خاص غشای نیتروسلولزی این است که می توان آن را به راحتی با چسب های مقاوم در برابر آب غیر حلال بر روی لایه های مختلف پلاستیکی چسباند.
شکل 01: غشای نیتروسلولزی برای وسترن بلات
PVDF چیست؟
Polyvinylidene difluoride (PVDF) فلوروپلیمری است که از پلیمریزاسیون وینیلیدین دی فلوراید تولید می شود و دارای قابلیت تثبیت بالایی پروتئین ها است.بنابراین، غشاهای میکرو متخلخل ساخته شده از PVDF در تکنیک های وسترن بلات برای تجزیه و تحلیل پروتئین های خاص از مخلوط پروتئین ها استفاده می شود. غشاهای PVDF همچنین می توانند برای آنالیز اسید آمینه و تعیین توالی پروتئین استفاده شوند. مهم ترین ویژگی غشای PVDF بر روی غشای نیتروسلولزی این است که می توان آن را به راحتی از آنتی بادی ها جدا کرد و برای پروب های آنتی بادی بعدی دوباره استفاده کرد.
غشاهای PVDF ضخیم‌تر از غشاهای نیتروسلولزی هستند. از این رو، در برابر آسیب در هنگام استفاده مجدد مقاوم تر است. غشاهای PVDF بسیار آبگریز هستند. بنابراین، آنها باید قبل از استفاده در متانول یا ایزوپروپانول خیس شوند.
تفاوت بین نیتروسلولز و PVDF چیست؟
نیتروسلولز در مقابل PVDF |
|
| Nitrocellulose پلیمری است که از سلولز تشکیل شده است. | PVDF یک فلوروپلیمر است که از پلیمریزاسیون وینیلیدین دی فلوراید تولید می شود. |
| اندازه منافذ غشاء | |
| اندازه منافذ معمولی 0.1، 0.2 یا 0.45μ است. | اندازه منافذ معمولی 0.1، 0.2 یا 0.45μm است |
| ظرفیت اتصال پروتئین | |
| نیتروسلولز دارای ظرفیت اتصال به پروتئین 80 تا 100 میکروگرم بر سانتی متر است2. | PVDF دارای ظرفیت اتصال به پروتئین 170 تا 200 میکروگرم بر سانتی متر است2. |
| حساسیت | |
| این نسبت به PVDF حساسیت کمی دارد. | این حساسیت بالایی دارد. |
| تشخیص پروتئین های کم بیان | |
| از آنجایی که حساسیت در غشاهای نیتروسلولزی کم است، برای تشخیص پروتئین های کم بیان مناسب نیست. | این برای تشخیص پروتئین های کم بیان به دلیل حساسیت بالا مناسب تر است. |
| صدای پس زمینه | |
| این نویز پس زمینه کمتری دارد | این نویز پس زمینه بالاتری دارد. |
| تعامل با پروتئین | |
| مولکول های پروتئین از طریق فعل و انفعالات آبگریز به غشاهای نیتروسلولز متصل می شوند. | پروتئین ها از طریق فعل و انفعالات آبگریز و دوقطبی به غشاهای PVDF متصل می شوند. |
| طبیعت غشاء | |
| نیتروسلولز شکننده و شکننده است. با این حال، نسخه‌های نیتروسلولز موجود است و مقاوم هستند. | PVDF بادوام تر است و مقاومت شیمیایی بالاتری دارد. |
| قابلیت حذف و استفاده مجدد | |
| نیتروسلولز ممکن است در جداسازی و بازیابی بدون از دست دادن سیگنال مشکل داشته باشد. | PVDF برای برنامه‌های کاربردی مجدد و توالی‌یابی ایده‌آل است. |
| مناسب | |
| نیتروسلولز برای تشخیص پروتئین های با وزن مولکولی کم ایده آل است. | PVDF برای تشخیص پروتئین های با وزن مولکولی بالاتر مناسب تر است. |
| کاربردهای دیگر | |
| نیتروسلولز را می توان برای آنالیز اسید نوکلئیک و لکه‌کردن نقطه/اسلات استفاده کرد. | PVDF را می توان برای توالی یابی پروتئین و سیستم های سنجش فاز جامد استفاده کرد. |
| هزینه | |
| این ارزانتر از غشاهای PVDF است. | این گرانتر از غشاهای نیتروسلولزی است. |
| نیاز به پیش خیس شدن | |
| غشاهای نیتروسلولزی نیازی به خیساندن با متانول ندارند | غشاهای PVDF نیاز به خیساندن با متانول دارند. |
خلاصه - نیتروسلولز در مقابل PVDF
غشاهای نیتروسلولزی اولین غشاهایی بودند که به صورت تجاری برای سنجش جریان جانبی استفاده شدند. آنها ظرفیت بالایی برای جذب پروتئین دارند. بنابراین در وسترن بلات از غشاهای نیتروسلولزی استفاده می شود. PVDF نوع دیگری از غشاء است که در وسترن بلات استفاده می شود و همچنین ظرفیت جذب پروتئین بالایی دارد. هر دو نوع در وسترن بلات برای تجزیه و تحلیل پروتئین استفاده می شود. با این حال، غشاهای PVDF دارای ویژگی‌های ویژه‌تری هستند که آنها را نسبت به غشاهای نیتروسلولزی برای وسترن بلات مناسب‌تر می‌کند. اما غشاهای نیتروسلولزی برای تشخیص پروتئین های با وزن مولکولی پایین مناسب تر هستند، غشاهای PVDF برای تشخیص پروتئین های با وزن مولکولی بالا مناسب تر هستند.این تفاوت بین غشاهای نیتروسلولز و PVDF است.
