تفاوت کلیدی - نیتروسلولز در مقابل غشای نایلونی
بلاتینگ یک تکنیک مهم برای تشخیص توالی های خاصی از DNA، RNA و پروتئین ها از مخلوط آنها در زیست شناسی مولکولی است. با استفاده از غشایی به نام بلات انجام می شود. روش های مختلفی مانند بلات شمالی، جنوبی و وسترن بلات وجود دارد. انتخاب یک غشای مناسب برای فرآیند بلات باید با دقت انجام شود تا از اتصال غیر اختصاصی و تشخیص اشتباه جلوگیری شود. نیتروسلولز، نایلون و PVDF معمولاً غشاهایی هستند که در تکنیک های بلات استفاده می شوند. ویژگی های متفاوتی دارند. تفاوت اصلی بین غشای نیتروسلولز و نایلون در این است که غشاهای نیتروسلولزی پتانسیل تثبیت پروتئین بالایی دارند در حالی که غشاهای نایلونی پتانسیل تثبیت اسید نوکلئیک بالایی دارند.با این حال، هر دو نوع غشا اغلب در تکنیک‌های بلات استفاده می‌شوند.
غشای نیتروسلولزی چیست؟
غشای نیتروسلولزی یک فیلتر غشایی متداول در تکنیک‌های نوکلئیک اسید و بلات پروتئین است. پتانسیل اتصال پروتئین بالایی دارد. از این رو، غشاهای نیتروسلولزی به طور گسترده در تکنیک وسترن بلات استفاده می شوند. غشاهای نیتروسلولزی با تمام تکنیک های هیبریداسیون سازگار هستند و بدون تداخل ظرفیت اتصال برتری را نشان می دهند. غشاهای نیتروسلولزی طبیعتاً آبدوست هستند. آنها برهمکنش آبدوست با مولکول ها ایجاد می کنند و به طور موثر آنها را روی غشاء بی حرکت می کنند. غشاهای نیتروسلولزی تجاری در دو اندازه منافذ موجود هستند: 0.45 و 0.2 میکرومتر.
شکل 01: غشای نیتروسلولزی مورد استفاده در وسترن بلات
ممبران نایلونی چیست؟
ممبران نایلونی نوع دیگری از غشای تجاری است که در تکنیک های بلات استفاده می شود. به طور متناوب با غشاهای نیتروسلولزی برای لکه گیری جنوبی و شمالی استفاده می شود. غشاهای نایلونی برای ساترن بلات نسبت به نیتروسلولز ایده آل هستند زیرا میل ترکیبی بالایی با DNA دارند. به دلیل چندین ویژگی منحصر به فرد غشاهای نایلونی، محققان معمولاً از غشاهای نایلونی برای لکه گیری جنوبی و شمالی به جای غشای نیتروسلولزی استفاده می کنند. غشاهای نایلونی نیز بر خلاف نیتروسلولز برای جداسازی و بازیابی توصیه می شوند.
شکل 02: غشای نایلونی مورد استفاده برای ساترن بلاتینگ
تفاوت بین نیتروسلولز و غشای نایلونی چیست؟
نیتروسلولز در مقابل غشای نایلونی |
|
| غشاهای نیتروسلولزی شکننده هستند. | غشاهای نایلونی کمتر شکننده هستند. |
| Handling | |
| رسیدگی به آنها دشوار است. | کار کردن با آنها آسان است. |
| Reprobing | |
| غشاهای نیتروسلولزی پشتیبانی نشده به سختی قابل بررسی هستند. | Reprobing با غشاهای نایلونی آسان است. |
| سازگاری با شرایط مختلف ذخیره سازی | |
| غشاهای نیتروسلولزی استحکام کمتری برای تحمل شرایط مختلف نگهداری دارند. | غشاهای نایلونی به شرایط مختلف نگهداری واکنش قوی تری نشان می دهند. |
| استفاده از | |
| پیش خیس کردن مورد نیاز است. | پیش خیس کردن برای غشاهای نایلونی لازم نیست. |
| طبیعت آبدوست | |
| غشاهای نیتروسلولزی ماهیت آبدوست دارند اما آبدوست کمتری نسبت به غشاهای نایلونی دارند. | آنها طبیعت بسیار آبدوست دارند. |
| پتانسیل بی حرکتی | |
| غشاهای نیتروسلولزی تمایل کمتری به اسیدهای نوکلئیک دارند. اما میل ترکیبی بالایی با پروتئین دارد. | غشاهای نایلونی پتانسیل اتصال بالایی با اسیدهای نوکلئیک نسبت به غشاهای نیتروسلولزی دارند. |
خلاصه - نیتروسلولز در مقابل غشای نایلونی
غشاهای نیتروسلولز و نایلون ورقه های خاصی هستند که در تکنیک بلاتینگ برای بازتولید الگوی نواری روی ژل استفاده می شوند.آنها امکان تشخیص یک توالی خاص یا یک پروتئین از مخلوط ها را با تثبیت آنها بر روی غشاء فراهم می کنند. هنگامی که مولکول ها روی غشاء تثبیت شدند، می توان از آن به عنوان بستری برای تجزیه و تحلیل هیبریداسیون با پروب های برچسب دار استفاده کرد. غشای نیتروسلولزی معمولاً برای تشخیص پروتئین در تکنیک وسترن بلات استفاده می شود زیرا میل پیوندی بالایی با پروتئین دارد. غشاهای نایلونی اغلب برای لکه گیری جنوبی و شمالی استفاده می شوند. این تفاوت بین غشای نیتروسلولز و نایلون است.
