تفاوت اصلی بین کاوشگرهای رادیواکتیو و غیر رادیواکتیو این است که کاوشگرهای رادیواکتیو توالی‌های DNA یا RNA تک رشته‌ای هستند که با ایزوتوپ‌های رادیواکتیو نشاندار شده‌اند در حالی که کاوشگرهای غیر رادیواکتیو توالی‌های DNA یا RNA تک رشته‌ای هستند که با برچسب شیمیایی یا برچسب‌گذاری شده‌اند. یک برچسب فلورسنت.
هیبریداسیون اسید نوکلئیک یک تکنیک مهم در زیست شناسی مولکولی، به ویژه در تشخیص میکروبی است. این به شناسایی یا تشخیص یک توالی اسید نوکلئیک خاص کمک می کند. در این روش، اسیدهای نوکلئیک روی یک سطح جامد ثابت شده و با یک پروب هیبرید می شوند. پروب قطعه ای از DNA یا RNA است که مکمل یک توالی مورد علاقه است.اگر توالی هدف در نمونه وجود داشته باشد، کاوشگر با آن هیبرید می شود و آن را قابل تشخیص می کند. دو نوع کاوشگر به عنوان پروب های رادیواکتیو و غیر رادیواکتیو وجود دارد. بنابراین، ما می توانیم کاوشگرها را با یک برچسب رادیواکتیو یا یک برچسب فلورسنت برچسب گذاری کنیم.
کاوشگرهای رادیواکتیو چیست؟
پروب‌های رادیواکتیو قطعات تک رشته‌ای DNA یا RNA با برچسب رادیواکتیو هستند. رادیوایزوتوپ ها در تهیه کاوشگرهای رادیواکتیو استفاده می شوند. رادیو ایزوتوپ‌های
32P، 33P و 35S معمولاً در برچسب‌گذاری پروب‌ها استفاده می‌شوند. علاوه بر این، رادیو ایزوتوپ‌های 3H و 1251 نیز به میزان کمتری در برچسب‌گذاری پروب‌ها استفاده می‌شوند. اما آنها برای کاربردهای خاص استفاده می شوند. در میان ایزوتوپ‌های رادیواکتیو، 32P رایج‌ترین ایزوتوپ مورد استفاده در برچسب‌گذاری کاوشگرهای رادیواکتیو است.
پروب های رادیواکتیو درجه بالاتری از قابلیت اطمینان و ویژگی را ارائه می دهند. بنابراین، آنها حداکثر حساسیت را ارائه می دهند و امکان تعیین کمیت دقیق توالی هدف را فراهم می کنند.با این حال، چندین معایب مرتبط با کاوشگرهای رادیواکتیو وجود دارد. نیمه عمر کوتاهی دارند. علاوه بر این، آنها خطرناک هستند و تولید، استفاده و دفع آنها هنگام جابجایی مشکل ساز است. علاوه بر این، آماده سازی کاوشگر رادیواکتیو یک فرآیند پرهزینه است. بنابراین، به دلیل مسائل ایمنی و هزینه، امروزه از کاوشگرهای رادیواکتیو به عنوان کاوشگرهای غیر رادیواکتیو استفاده نمی شود.
کاوشگرهای غیر رادیواکتیو چیست؟
پروب‌های غیر رادیواکتیو دومین نوع پروب‌هایی هستند که از نظر شیمیایی برچسب‌گذاری می‌شوند. دیگوکسیژنین یک پروب غیر رادیواکتیو است که یک نشانگر مبتنی بر آنتی بادی است. پروب های دیگوکسیژنین اختصاصی و حساس هستند. بیوتین برچسب دیگری است که در تهیه پروب غیر رادیواکتیو استفاده می شود. بیوتین/استرپتاویدین و دیگوکسیژنین/سیستم های تشخیص آنتی بادی رایج ترین پروب های غیر رادیواکتیو در هیبریداسیون هستند. علاوه بر این، سیستم پراکسیداز ترب کوهی یکی دیگر از سیستم های کاوشگر غیر رادیواکتیو است. هنگامی که این پروب های غیر رادیواکتیو با توالی های هدف هیبرید می شوند، می توان آنها را از طریق اتورادیوگرافی یا سایر تکنیک های تصویربرداری شناسایی کرد.
شکل 01: هیبریداسیون با پروب های غیر رادیواکتیو
پروب‌های غیر رادیواکتیو بیشتر در هیبریداسیون اسید نوکلئیک از پروب‌های رادیواکتیو استفاده می‌شوند. این به این دلیل است که کاوشگرهای غیر رادیواکتیو با مواد خطرناک مرتبط نیستند. علاوه بر این، روش‌های تشخیص غیر رادیواکتیو به زمان‌های نوردهی کوتاه‌تری برای تشخیص سیگنال هیبریداسیون نیاز دارند. با این حال، مراحل دخیل در هیبریداسیون DNA با پروب های غیر رادیواکتیو معمولا خسته کننده و وقت گیر هستند. علاوه بر این، راه حل های تجاری موجود گران هستند.
شباهت‌های بین کاوشگرهای رادیواکتیو و غیررادیواکتیو چیست؟
- کاوشگرهای رادیواکتیو و غیر رادیواکتیو دو نوع پروب هستند که در هیبریداسیون اسید نوکلئیک استفاده می شوند.
- آنها تشخیص توالی هدف را در نمونه تسهیل می کنند.
- هر دو نوع پروب به یک اندازه حساس و خاص هستند.
تفاوت بین کاوشگرهای رادیواکتیو و غیر رادیواکتیو چیست؟
پروب‌های رادیواکتیو توالی‌های تک رشته‌ای DNA یا RNA هستند که با ایزوتوپ‌های رادیواکتیو نشاندار شده‌اند، در حالی که کاوشگرهای غیررادیواکتیو توالی‌های DNA یا RNA تک‌رشته‌ای هستند که با یک برچسب شیمیایی نشاندار شده‌اند. بنابراین، این تفاوت اصلی بین کاوشگرهای رادیواکتیو و غیر رادیواکتیو است. همچنین ایزوتوپ های رادیواکتیو خطرناک هستند. بنابراین، کاوشگرهای رادیواکتیو به طور قابل توجهی خطرناک هستند، در حالی که کاوشگرهای غیر رادیواکتیو خطرناک نیستند.
علاوه بر این، تفاوت دیگر بین کاوشگرهای رادیواکتیو و غیر رادیواکتیو، معایب آنهاست. نیمه عمر کوتاه و خطرات مربوط به تولید، استفاده و دفع آنها از معایب استفاده از کاوشگرهای رادیواکتیو است. از سوی دیگر، مراحل دخیل در هیبریداسیون DNA با پروب های غیر رادیواکتیو معمولا خسته کننده و زمان بر هستند.
اینفوگرافیک زیر مقایسه های بیشتری را در رابطه با تفاوت بین کاوشگرهای رادیواکتیو و غیررادیواکتیو نشان می دهد.
خلاصه - کاوشگرهای رادیواکتیو در مقابل غیر رادیواکتیو
کاوشگر قطعه ای از DNA یا RNA است که حاوی یک توالی نوکلئوتیدی است که مکمل توالی مورد نظر است. به منظور شناسایی توالی هدف، کاوشگرها را می توان به صورت رادیواکتیو، فلورسنت یا شیمیایی برچسب گذاری کرد. پروب ها با توالی های مکمل در نمونه متصل می شوند. کاوشگرهای رادیواکتیو با ایزوتوپ های رادیواکتیو نشاندار می شوند در حالی که کاوشگرهای غیر رادیواکتیو با بیوتین، دیگوکسیژنین یا پراکسیداز ترب کوهی نشاندار می شوند. بنابراین، این تفاوت اصلی بین کاوشگرهای رادیواکتیو و غیر رادیواکتیو است.
