تفاوت اصلی بین فوکوس کروماتوفوکوس و فوکوس ایزوالکتریک این است که کروماتوکوسینگ نوعی روش کروماتوگرافی ستونی است که از رزین های تبادل یونی استفاده می کند در حالی که فوکوس ایزوالکتریک نوعی تکنیک الکتروفورز است که از ژل های گرادیان pH بی حرکت استفاده می کند..
فوکوس کروماتوفوکوس و فوکوس ایزوالکتریک دو تکنیکی هستند که پروتئین ها را بر اساس نقاط ایزوالکتریکشان جدا می کنند. هم فوکوس کروماتوفوکوس و هم فوکوس ایزوالکتریک قدرت تفکیک بالایی دارند. کروماتوفوکوس یک روش کروماتوگرافی ستونی با وضوح بالا است در حالی که فوکوس ایزوالکتریک یک روش جداسازی الکتروفورتیک است.علاوه بر این، فوکوس کروماتو از میدان الکتریکی استفاده نمی کند در حالی که فوکوس ایزوالکتریک به میدان الکتریکی نیاز دارد.
Chromatofocusing چیست؟
Chromatofocusing یک نوع کروماتوگرافی با شستشوی بالا است که پروتئین ها را بر اساس تفاوت در نقطه ایزوالکتریک آنها جدا می کند. از یک ستون رزین تبادل یونی و یک گرادیان pH توسعه یافته داخلی استفاده می کند. بر خلاف فوکوس ایزوالکتریک، فوکوس کروماتوفوکوس شامل میدان الکتریکی نمی شود. کروماتوفوکوسینگ یک تکنیک خالص سازی قدرتمند است که می تواند مولکول های بسیار مشابه را حتی تنها با 0.02 واحد pH از هم جدا کند. بنابراین، زمانی که برای جداسازی اجزای بسیار مشابه به وضوح بالا نیاز است، فوکوس رنگی به عنوان مرحله نهایی پرداخت مناسب است.
در کروماتوکوسینگ، نمونه با مخلوط کردن آن با بافر شروع به ستون اعمال می شود. پروتئین هایی که در pH بالاتر از نقطه ایزوالکتریک خود هستند دارای بار منفی هستند و در نزدیکی بالای ستون باقی می مانند در حالی که سایر پروتئین هایی که در pH پایین تر از نقطه ایزوالکتریک خود هستند، به سمت پایین ستون مهاجرت می کنند.پروتئین با بالاترین نقطه ایزوالکتریک ابتدا شسته می شود در حالی که پروتئین با پایین ترین نقطه ایزوالکتریک آخرین از ستون شسته می شود. این تکنیک تحت تأثیر عوامل متعددی مانند رسوب پروتئین و خطی بودن گرادیان pH قرار می گیرد.
فوکوسینگ ایزوالکتریک چیست؟
فوکوس ایزوالکتریک تکنیکی است که مولکول های مختلف را بر اساس نقطه ایزوالکتریک آنها جدا می کند. همچنین به عنوان فوکوس الکتریکی شناخته می شود. این تکنیک اغلب برای جداسازی پروتئین در ژل استفاده می شود. در فوکوس ایزوالکتریک، نمونه به ژل های شیب pH بی حرکت (IPG) اضافه می شود. ژل IPG یک ماتریس ژل آکریل آمید است که با گرادیان pH کوپلیمر شده است. پروتئین ها تا زمانی که ناحیه pH نقاط ایزوالکتریک خود را پیدا کنند به سمت کاتد مهاجرت می کنند. هنگامی که یک پروتئین به pH می رسد که بار خالص ندارد، مهاجرت متوقف می شود و یک نوار ثابت ایجاد می کند. به همین ترتیب، هر پروتئین یک نوار در نقطه ای از گرادیان pH مربوط به نقطه ایزوالکتریک آن می دهد.
شکل 01: فوکوس ایزوالکتریک
فوکوس ایزوالکتریک اولین مرحله الکتروفورز ژل دو بعدی است. در این روش، پروتئین ها ابتدا بر اساس نقاط ایزوالکتریک خود با تمرکز ایزوالکتریک جدا می شوند و سپس با وزن مولکولی خود از طریق SDS-PAGE جدا می شوند.
شباهت‌های بین فوکوس کروماتوفوکوس و فوکوس ایزوالکتریک چیست؟
- فوکوس کروماتوفوکوس و فوکوس ایزوالکتریک دو روش بسیار قابل حل هستند.
- هر دو بر اساس نقطه ایزوالکتریک پروتئین ها هستند.
- این تکنیک ها از گرادیان pH استفاده می کنند.
- هر دو روش برای توصیف انواع هموگلوبین انسانی آموزنده هستند.
- آنها می توانند مولکول هایی را که در آن مقادیر pI به اندازه 0.02 واحد pH متفاوت است، حل کنند.
تفاوت بین فوکوس کروماتوفوکوس و فوکوس ایزوالکتریک چیست؟
Chromatofocusing یک تکنیک کروماتوگرافی ستونی با وضوح بالا است که پروتئین ها را بر اساس نقطه ایزوالکتریک آنها جدا می کند. در مقابل، تمرکز ایزوالکتریک یک تکنیک الکتروفورتیک است که پروتئین ها را بر اساس نقطه ایزوالکتریک آنها با اعمال میدان الکتریکی در امتداد شیب pH تشکیل شده در یک مویرگ جدا می کند. بنابراین، این تفاوت اصلی بین فوکوس کروماتوفوکوس و فوکوس ایزوالکتریک است.
تفاوت دیگر بین فوکوس کروماتوفوکوس و فوکوس ایزوالکتریک این است که فوکوس کروماتوفوکوس شامل میدان الکتریکی نمی شود در حالی که فوکوس ایزوالکتریک به میدان الکتریکی نیاز دارد.
خلاصه - فوکوس کروماتوفوکوس در مقابل فوکوس ایزوالکتریک
فوکوس کروماتوفوکوس و فوکوس ایزوالکتریک دو تکنیک مشابه هستند که توانایی تفکیک بالایی مولکول ها، به ویژه مولکول های بسیار مشابه دارند. کروماتوفوکوسینگ یک تکنیک کروماتوگرافی ستونی با وضوح بالا است در حالی که فوکوس ایزوالکتریک یک روش الکتروفورز است. بر خلاف فوکوس ایزوالکتریک، کروماتوکوس شامل میدان الکتریکی نمی شود. بنابراین، این تفاوت بین فوکوس کروماتوفوکوس و فوکوس ایزوالکتریک را خلاصه می کند.
