تفاوت اصلی بین Elisa و Elispot این است که Elisa یک سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم است که غلظت کل پروتئین‌های سیگنال‌دهنده ترشح شده را تعیین می‌کند، در حالی که Elispot یک سنجش ایمنی متصل به آنزیم است که سلول‌های ترشح کننده سیتوکین را شناسایی می‌کند.
Elisa و Elispot دو سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم هستند که به طور گسترده در پزشکی، آسیب شناسی گیاهی، بیوتکنولوژی و صنایع مختلف دارویی استفاده می شوند. در این تکنیک ها، یک آنالیت پروتئینی توسط یک آنتی بادی که علیه آن است شناسایی می شود. Elisa محبوب ترین روش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم است که در آزمایشگاه ها استفاده می شود. از سوی دیگر، Elispot یک سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم است که به جای Elisa استفاده نمی شود، بلکه علاوه بر الایزا در آزمایشگاه ها استفاده می شود.
Elisa Assay چیست؟
Elisa یک سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم است که غلظت کل پروتئین های سیگنالینگ ترشح شده را تعیین می کند. این یک روش بیوشیمی تحلیلی پرکاربرد است که برای اولین بار توسط Engvall و Perlmann در سال 1971 توصیف شد. این تکنیک از نوع فاز جامد آنزیم ایمونواسی برای تشخیص حضور یک پروتئین خاص در یک نمونه مایع با استفاده از آنتی بادی های ضد این پروتئین خاص استفاده می کند. این سنجش یک ابزار تشخیصی رایج در پزشکی، آسیب شناسی گیاهی و بیوتکنولوژی است.
مکانیسم آزمایش الایزا
در اکثر آزمایشات الایزا، مقدار نامعلومی از آنتی ژن در ابتدا روی یک تکیه گاه جامد (صفحه میکرولیتری) بی حرکت می شود. سپس آنتی بادی اولیه منطبق بر روی سطح تکیه گاه جامد اعمال می شود. این آنتی بادی با آنتی ژن (کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی) کمپلکس تشکیل می دهد. آنتی بادی اولیه متصل به آنتی ژن را می توان توسط یک آنتی بادی ثانویه که از طریق بیوکونژوگاسیون به یک آنزیم مرتبط است، شناسایی کرد.در مرحله آخر آزمایش الایزا، ماده ای حاوی سوبسترای آنزیم اضافه می شود. اگر اتصال مناسب آنتی بادی اولیه به آنتی ژن وجود داشته باشد، تغییر رنگ قابل تشخیص توسط سوبسترا ایجاد می شود. در نهایت، این آنتی ژن موجود در نمونه را کمیت می کند.
شکل 01: انواع مختلف Elisa
علاوه بر این، رویکردهای مختلفی برای الایزا وجود دارد، مانند الایزا مستقیم و الایزا غیر مستقیم. در حال حاضر، آزمایش‌های مختلف الایزا برای شناسایی پاتوژن‌های انسانی مانند مایکوباکتریوم توبرکلوزیس، روتاویروس، ویروس هپاتیت B، ویروس هپاتیت C، E.coli مولد انتروتوکسین، HIV و SARS-CoV-2 استفاده می‌شود.
Elispot Assay چیست؟
Elispot یک سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم است که سلول های ترشح کننده سیتوکین را شناسایی می کند. Cecil Czerkinsky اولین بار در سال 1983 ELISpot را توصیف کرد.این یک نوع سنجش است که بر روی اندازه گیری کمی فرکانس ترشح سیتوکین برای یک سلول متمرکز است. همچنین به عنوان تکنیکی طبقه بندی می شود که از آنتی بادی ها برای تشخیص آنالیت پروتئین بیولوژیکی یا شیمیایی استفاده می کند. سنجش فلوراسپات گونه‌ای از روش Elispot است که از فلورسانس برای آنالیز چندین آنالیت (پروتئین‌های مخفی‌تر) استفاده می‌کند.
مکانیسم تست Elispot
در این مکانیسم، ابتدا آنتی بادی های مونوکلونال اختصاصی سیتوکین به چاهک های صفحات میکرولیتری اضافه می شود. سپس سلول های مورد نظر در حال مشاهده به چاهک ها اضافه می شوند. بعداً سلول ها انکوبه می شوند. در طول انکوباسیون سلولی، سلول ها اجازه دارند به هر محرکی واکنش نشان دهند و سیتوکین ترشح کنند. سیتوکین هایی که توسط سلول های انکوبه شده ترشح می شوند به آنتی بادی ها متصل می شوند زیرا سلول ها توسط آنتی بادی های مونوکلونال اختصاصی سیتوکین احاطه شده اند.
شکل 02: سنجش Elispot
برای شناسایی این آنتی بادی های مونوکلونال اختصاصی سیتوکین، آنتی بادی های تشخیص اختصاصی بیوتینیله شده به چاه اضافه می شود. آنتی بادی های تشخیص اختصاصی بیوتینیله، آنتی بادی های مونوکلونال اختصاصی سیتوکین را در چاهک ها جذب می کنند. علاوه بر این، کونژوگه های استرپتاویدین-آنزیم به چاهک ها اضافه می شوند تا با آنتی بادی های تشخیص متصل شوند. در مرحله آخر، بسترهای خاصی به چاه ها اضافه می شود. واکنش های مزدوج و بسترهای آنزیمی باعث ایجاد لکه های مشخص در چاهک ها می شود. این نقاط متمایز در یک خواننده خودکار ELISpot خوانده می شوند. در نهایت، این روش فرکانس ترشح سیتوکین را بیشتر محاسبه می کند.
شباهت های Elisa و Elispot چیست؟
- آنها هر دو سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم هستند.
- هر دو سنجش آنالیت های پروتئین خاصی را شناسایی می کنند.
- این سنجش ها از آنتی بادی های خاص برای شناسایی آنالیت های پروتئین استفاده می کنند.
- هر دو سنجش از آنزیم ها و سوبستراها استفاده می کنند.
- آنها به عنوان یک ابزار تشخیصی در آزمایشگاه های پزشکی استفاده می شوند.
تفاوت بین Elisa و Elispot چیست؟
Elisa یک سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم است که غلظت کل پروتئین های سیگنالینگ ترشح شده را تعیین می کند. از سوی دیگر، Elispot یک سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم است که سلول های ترشح کننده سیتوکین را اندازه گیری می کند. بنابراین، این تفاوت اصلی بین Elisa و Elispot است. علاوه بر این، در آزمایش الایزا، آنتی ژن ابتدا روی چاهک های میکرولیتری تثبیت می شود. در مقابل، در تست Elispot، آنتی بادی ابتدا روی چاه های میکرولیتری بی حرکت می شود. بنابراین، این تفاوت دیگری بین Elisa و Elispot است.
اینفوگرافیک زیر تجزیه و تحلیل مفصلی از تفاوت بین Elisa و Elispot را به شکل جدول ارائه می دهد.
خلاصه - Elisa vs Elispot
Elisa و Elispot دو سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم هستند که به طور گسترده در پزشکی، آسیب شناسی گیاهی، بیوتکنولوژی و صنایع مختلف دارویی استفاده می شوند. الایزا حضور یک لیگاند (پروتئین) را در یک نمونه مایع با استفاده از آنتی بادی هایی که علیه لیگاند مورد اندازه گیری قرار می گیرند، تشخیص می دهد. روش Elispot روشی است که به طور گسترده برای نظارت بر پاسخ های ایمنی مورد استفاده قرار می گیرد. با استفاده از آنتی بادی ها، سلول های ترشح کننده سیتوکین را شناسایی می کند. این هم یک روش ایمونواسی و هم روش زیست سنجی است. بنابراین، این خلاصه تفاوت بین Elisa و Elispot است.
