تفاوت اصلی بین گرادیان ساکارز و اولتراسانتریفیوژ بالشتک ساکارز در این است که در اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز، از گرادیان ساکارز پیوسته استفاده می شود، در حالی که در اولتراسانتریفیوژ بالشتک ساکارز، از گرادیان ساکارز ناپیوسته استفاده می شود. استفاده می شود.
گرادیان ساکارز و اولتراسانتریفیوژ با بالشتک ساکارز دو نوع تکنیک مشابهی هستند که برای جداسازی انواع خاصی از ماکرومولکول ها استفاده می شوند. در هر دو روش، از گرادیان چگالی ساکارز استفاده می شود. اما در اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز، از گرادیان چگالی پیوسته استفاده می شود، در حالی که، در اولتراسانتریفیوژ با بالشتک ساکارز، از گرادیان چگالی ناپیوسته استفاده می شود.
اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز چیست؟
اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز تکنیکی است که می تواند برای تکه تکه کردن ماکرومولکول هایی مانند DNA، RNA و پروتئین ها استفاده شود. چندین مرحله در این تکنیک وجود دارد. آنها آماده سازی گرادیان ساکارز، سانتریفیوژ، جداسازی و شستشو هستند. آماده سازی گرادیان مرحله کلیدی در این تکنیک است. در این روش، نمونه حاوی ماکرومولکول‌های با اندازه‌های مختلف بر روی سطح یک ستون گرادیان ساکارز لایه‌بندی می‌شود. هنگام سانتریفیوژ کردن، ماکرومولکول‌های با اندازه‌های مختلف در ستون گرادیان ساکارز با سرعت‌های متفاوتی رسوب می‌کنند. ته نشینی به عوامل مختلفی از جمله نیروی سانتریفیوژ، شکل اندازه و چگالی ماکرومولکول ها، چگالی و ویسکوزیته گرادیان بستگی دارد. در پایان سانتریفیوژ، ماکرومولکول‌ها از نظر چگالی از هم جدا می‌شوند. ماکرومولکول های بزرگتر (درشت مولکول های با چگالی بالا) به سمت پایین رسوب می کنند. مولکول های سبک تر (درشت مولکول های کم چگالی) در بالای شیب باقی می مانند.بنابراین، مولکول ها به صورت نوارهای مختلف از هم جدا می شوند. سپس نوارها باید جدا شوند و خالص سازی ماکرومولکول خاص از ساکارز باید انجام شود.
شکل 01: اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز
در سمت کاربرد، این روش به طور گسترده برای شکنش مولکول های DNA استفاده می شود. اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز معمولاً برای تعیین اندازه و ترکیب پروتئین کمپلکس استفاده می شود. علاوه بر این، این تکنیک برای خالص سازی جزئی mRNA استفاده می شود.
اولتراسانتریفیوژ بالشتک ساکارز چیست؟
اولتراسانتریفیوژ با بالشتک ساکارز تکنیک دیگری است که تکه تکه شدن ماکرومولکول ها را امکان پذیر می کند. برخلاف اولتراسانتریفیوژ با گرادیان چگالی ساکارز، اولتراسانتریفیوژ با بالشتک ساکارز از گرادیان چگالی ناپیوسته استفاده می کند.غلظت ساکارز از بالا به پایین در مراحل گسسته افزایش می یابد. در این روش، جداسازی با قرار دادن عصاره شفاف شده در بالای حجم کمی از محلول ساکارز در یک لوله سانتریفیوژ، به اصطلاح بالشتک ساکارز، حاصل می شود. این امکان جداسازی بهتر در سانتریفیوژ با سرعت بالا را فراهم می کند. هنگامی که مولکول ها به صورت نواری بین بالشتک ساکارز جدا می شوند، نوار سفید را می توان جمع آوری و خالص کرد. علاوه بر این، ناخالصی ها را می توان با استفاده از روش بالشتک ساکارز حذف کرد. روش بالشتک ساکارز اجازه می دهد تا 60-70 درصد لوله با نمونه پر شود. از این رو، روش بالشتک ساکارز امکان پردازش حجم بیشتری از نمونه را فراهم می کند.
شباهت‌های بین گرادیان ساکارز و اولتراسانتریفیوژ بالشتک ساکارز چیست؟
- گرادیان ساکارز و اولتراسانتریفیوژ با بالشتک ساکارز دو تکنیکی هستند که برای جداسازی مخلوطی از ماکرومولکول ها استفاده می شوند.
- در هر دو روش، از گرادیان ساکارز استفاده می شود.
- سانتریفیوژ یک مرحله در هر دو روش است.
- مولکول ها در هر روش به صورت نوار یا ناحیه رسوب می کنند.
تفاوت بین اولتراسانتریفیوژ ساکارز گرادیان و ساکارز بالشتک چیست؟
اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز تکنیکی است که از گرادیان ساکارز پیوسته در لوله سانتریفیوژ استفاده می کند در حالی که اولتراسانتریفیوژ با بالشتک ساکارز تکنیکی است که از گرادیان ساکارز ناپیوسته استفاده می کند. بنابراین، این تفاوت اصلی بین گرادیان ساکارز و اولتراسانتریفیوژ بالشتک ساکارز است.
علاوه بر این، اولتراسانتریفیوژ با بالشتک ساکارز اجازه می دهد تا حجم بیشتری از نمونه پردازش شود در حالی که اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز اجازه می دهد تا حجم نسبتاً کمی از نمونه پردازش شود.
در جدول اینفوگرافیک زیر تفاوت‌های بیشتری بین گرادیان ساکارز و اولتراسانتریفیوژ بالشتک ساکارز نشان داده شده است.
خلاصه - گرادیان ساکارز در مقابل اولتراسانتریفیوژ بالشتک ساکارز
اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز، ماکرومولکول ها را با استفاده از گرادیان ساکارز پیوسته جدا می کند. در مقابل، اولتراسانتریفیوژ بالشتک ساکارز از یک گرادیان ساکارز ناپیوسته به منظور جداسازی نوع خاصی از ذرات در یک مخلوط استفاده می کند. بنابراین، این تفاوت اصلی بین گرادیان ساکارز و اولتراسانتریفیوژ بالشتک ساکارز است. روش بالشتک ساکارز امکان جمع‌آوری ذرات دست‌نخورده مورفولوژیکی را فراهم می‌کند، زیرا برخلاف اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز، که مولکول‌ها را تا انتهای لوله خرد می‌کند، استرس مکانیکی ایجاد نمی‌کند. علاوه بر این، اولتراسانتریفیوژ با بالشتک ساکارز اجازه می دهد تا حجم بیشتری از نمونه نسبت به اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز پردازش شود.
