تفاوت کلیدی - RNASE A در مقابل RNASE H
ریبونوکلئازها نوکلئازهایی هستند که به طور خاص RNA را به واحدهای کوچکتر تجزیه می کنند. آنها را می توان به دو دسته تقسیم کرد؛ اندوریبونوکلئازها و اگزوریبونوکلئازها. اندوریبونوکلئاز یک اندونوکلئاز است که می تواند RNA تک رشته ای یا دو رشته ای را تجزیه کند. پیوندهای فسفودی استر را در یک زنجیره پلی نوکلئوتیدی RNA می شکند. نمونه‌ها RNase A، RNase III، RNase T1، RNase P و RNase H هستند. Exoribonuclease یک اگزونوکلئاز است که با حذف نوکلئوتیدهای انتهایی از انتهای 5 یا 3 مولکول RNA، RNA را تجزیه می‌کند. نمونه ها RNase R، RNase II، RNase D و RNase PH هستند.تفاوت اصلی بین RNASE A و RNASE H در این است که RNase A یک ریبونوکلئاز پانکراس است که به طور خاص RNA تک رشته ای را به اجزای کوچکتر تجزیه می کند در حالی که RNase H یک آنزیم غیر اختصاصی است که RNA موجود در هیبرید RNA-DNA را از طریق به واحدهای کوچکتر می شکافد. مکانیسم هیدرولیتیک.
RNASE A چیست؟
RNase A یک ریبونوکلئاز لوزالمعده است که به طور خاص باقیمانده های سیتوزین و اوراسیل جفت نشده را در انتهای 3' RNA تک رشته ای می شکافد. RNase H در غلظت نمک بالاتر (0.3M یا غلظت NaCl بالاتر) کار می کند. واکنش هیدرولیتیک دو مرحله ای است. این محصول یک محصول فسفریله 3 اینچ را از طریق مونوفسفات حلقوی 2 اینچ و 3 اینچ تشکیل می دهد. اگرچه برای RNA تک رشته ای در غلظت نمک بالاتر است، اما همچنین می تواند RNA و RNA دو رشته ای را در هیبرید RNA-DNA در غلظت NaCl کمتر (کمتر از 0.3M NaCl) تجزیه کند.
Bruce Merrifield اولین بار این آنزیم را سنتز کرد. RNase A یک آنزیم بسیار محبوب در تحقیقات مولکولی است. RNase A پانکراس گاوی نمونه ای از RNase A است و یکی از مقاوم ترین آنزیم هایی است که در آزمایشگاه استفاده می شود. این آنزیم برای فعالیت خود نیازی به کوفاکتور ندارد. این آنزیم بسیار پایدار در برابر حرارت است. RNase A اولین آنزیم و سومین پروتئینی است که یک توالی اسید آمینه صحیح به آن شناسایی شد. این آنزیم بسیار کوچک با 124 اسید آمینه و جرم مولکولی 12600da است. و دارای چهار باقیمانده هیستیدین است (His 12 و His 119 که در واکنش کاتالیزوری دخالت دارند).
شکل 01: RNase A
RNase A را می توان با جوشاندن یک نمونه خام جدا کرد. هنگامی که به جوش می آید، تمام آنزیم های دیگر RNase A باقی مانده را تجزیه می کنند. RNase A یک آنزیم شگفت آور پایدار است. این آنزیم با پروتئین بازدارنده ریبونوکلئاز، فلزات سنگین و کمپلکس های یوریدین وانادات مهار می شود.
RNase H چیست؟
RNase H یک آنزیم ریبونوکلئاز غیر اختصاصی است که می تواند RNA را در هیبرید RNA-DNA از طریق واکنش هیدرولیتیک تجزیه کند. RNase H پیوند 3'- O-P RNA را در یک هیبرید RNA-DNA می شکند. در نهایت محصولاتی با 3’OH و 5’ فسفات تولید می کند. در همانندسازی DNA با حذف پرایمر RNA پس از تشکیل رشته های DNA جدید، نقش محوری ایفا می کند. در شرایط آزمایشگاهی، به طور خاص RNA را در هیبرید RNA-DNA تجزیه می کند، اما DNA و RNA هیبرید نشده را تجزیه نمی کند. و این آنزیم معمولاً برای از بین بردن الگوی RNA پس از تشکیل اولین رشته DNA مکمل در طی سنتز cDNA استفاده می شود.
شکل 02: RNase H
RNase H همچنین در سنجش های محافظت از نوکلئاز استفاده می شود. همچنین می توان آن را با حذف دم پلی A از mRNA ترکیب کرد. RNase H توانایی تخریب RNA غیر کدکننده را در داخل و خارج سلول دارد.یون های فلزی به عنوان کوفاکتور برای این فعالیت پروتئین مورد نیاز هستند. یک شلاتور (EDTA) می تواند برای مهار آنزیم RNase H استفاده شود.
شباهت‌های بین RNASE A و RNASE H چیست؟
- هر دو در طبیعت پروتئین هستند.
- هر دو اندوریبونوکلئاز هستند
- هر دو می توانند RNA را تجزیه کنند.
- هر دو واکنش هیدرولیتیک انجام می دهند.
- آزمایشگاه های مولکولی از هر دوی اینها استفاده می کنند.
تفاوت بین RNASE A و RNASE H چیست؟
RNASE A در مقابل RNASE H |
|
| RNase A یک ریبونوکلئاز پانکراس است که به طور خاص انتهای 3 سیتوزین و اوراسیل جفت نشده RNA تک رشته ای را در غلظت نمک بالاتر می شکافد. | RNase H یک آنزیم ریبونوکلئاز غیر اختصاصی است که می تواند RNA را در هیبرید RNA-DNA از طریق واکنش هیدرولیتیک تجزیه کند. |
| ماهیت جداسازی RNA | |
| RNase A به طور خاص RNA تک رشته ای را در غلظت نمک بالاتر می شکافد. | RNase H RNA را در هیبرید RNA-DNA می شکافد. |
| نیاز به عوامل مشارکتی برای فعالیت | |
| RNase A برای فعالیت خود به کوفاکتور نیاز ندارد. | RNase H برای فعالیت خود به یون های فلزی به عنوان کوفاکتور نیاز دارد. |
| مهارکننده‌های فعالیت پروتئین | |
| پروتئین بازدارنده ریبونوکلئاز، کمپلکس های فلز سنگین و یوریدین وانادات فعالیت RNAse A را مهار می کند. | یک شلاتور (EDTA) فعالیت RNase H را مهار می کند. |
| حذف پرایمر RNA در همانندسازی DNA | |
| RNase A برای حذف پرایمر RNA در همانندسازی DNA استفاده نمی شود. | RNase H برای حذف پرایمر RNA در همانندسازی DNA استفاده می شود |
| حذف الگوی DNA در سنتز DNA مکمل (C-DNA) | |
| RNase A برای حذف الگوی RNA در طول سنتز DNA مکمل (C-DNA) استفاده نمی شود. | RNase H برای حذف الگوی RNA در طول سنتز DNA مکمل (C-DNA) استفاده می شود. |
| حذف Poly-A-Tail در mRNA هیبرید شده به Oligo (dt) | |
| RNase A برای حذف "دنبال پلی-A" در mRNA هیبرید شده به الیگو (dt) استفاده نمی شود. | RNase H برای حذف "دنبال پلی-A" در mRNA هیبرید شده به الیگو (dt) استفاده می شود. |
خلاصه - RNASE A در مقابل RNASE H
ریبونوکلئازها آنزیم های نوکلئازی هستند که توانایی تجزیه RNA را به واحدهای کوچکتر دارند. آنها دو نوع هستند; اندوریبونوکلئازها و اگزوریبونوکلئازها. اندوریبونوکلئاز یک اندونوکلئاز است که توانایی تجزیه RNA تک رشته ای یا دو رشته ای را دارد. و پیوند فسفودی استر را در یک زنجیره پلی نوکلئوتیدی RNA می شکند. RNase A و RNase H دو اندوریبونوکلئاز هستند. RNase A یک ریبونوکلئاز لوزالمعده است که به طور خاص سیتوزین و اوراسیل جفت نشده را در انتهای 3' RNA تک رشته ای در غلظت نمک بالاتر می شکافد. RNase H یک آنزیم ریبونوکلئاز غیر اختصاصی است که می تواند RNA را در هیبرید RNA-DNA از طریق واکنش هیدرولیتیک تجزیه کند. این تفاوت بین RNase A و RNase H است.
دانلود PDF RNASE A در مقابل RNASE H
می توانید نسخه PDF این مقاله را دانلود کنید و طبق یادداشت نقل قول برای اهداف آفلاین از آن استفاده کنید. لطفاً نسخه PDF را از اینجا دانلود کنید تفاوت بین RNASE A و RNASE H
